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目的:以细胞形态改变和tau蛋白过度磷酸化为反映AD(Alzheimer’s Disease)发生发展的关键指标,初步探明实验性AD诱导产生过程中的PTEN变化状况及其与tau蛋白过度磷酸化的关系,以深化理解AD的发病机制。方法:①采用冈田酸(Okadaic acid,OA)诱导SH-SY5Y细胞和NG108-15细胞,以细胞形态改变和tau蛋白过度磷酸化为观察指标,建立用于AD研究的细胞模型。②倒置显微镜观察细胞形态的变化。③Western blot法测定SH-SY5Y细胞和NG108-15细胞Ser396位点磷酸化tau蛋白水平和PTEN蛋白水平。④RT-PCR方法观测SH-SY5Y细胞PTEN mRNA水平。结果:1.冈田酸诱导SH-SY5Y细胞AD样发生发展中PTEN的变化:①OA孵育SH-SY5Y细胞可显著改变细胞的形态,随OA孵育时间的延长,6 h后细胞开始变圆,突触缩回,18 h后细胞大部分变圆,突触消失,48 h后细胞漂浮生长,部分细胞呈死亡状态;40 nmol/L OA作用于细胞,Ser396位点磷酸化tau蛋白水平在OA孵育后12 h显著升高, 18 h、24 h达高峰,之后下降,48 h显著降低。提示OA可诱导SH-SY5Y细胞进行性损伤变性和tau蛋白过度磷酸化。②40 nmol/L OA孵育SH-SY5Y细胞,同时观测细胞中Ser396位点磷酸化tau蛋白水平和PTEN蛋白水平随OA作用时间的变化,可见Ser396位点磷酸化tau蛋白水平变化同上,而PTEN蛋白水平则于3 h、6 h显著升高,6 h达高峰,之后下降,48 h显著降低。提示在OA诱导SH-SY5Y细胞AD样发生发展过程中,PTEN蛋白水平呈先升高后降低的变化。③40nmol/L OA作用于SH-SY5Y细胞,PTEN mRNA水平于12 h、18 h、24 h显著升高,其它时间点未见明显变化,提示在OA诱导SH-SY5Y细胞AD样发生发展过程中,PTEN mRNA水平存在着变化。2.冈田酸诱导NG108-15细胞AD样发生发展中PTEN的变化:①OA孵育NG108-15细胞,随OA孵育时间的延长,6 h后细胞未见明显变化,18 h后细胞变圆,开始贴壁不牢,48 h后细胞呈悬浮生长,但胞壁完整;20 nmol/L OA作用于细胞,Ser396位点磷酸化tau蛋白水平在OA孵育后6 h开始显著升高,18 h达高峰,48 h仍然显著升高。提示随OA孵育时间的延长,NG108-15细胞可发生进行性损伤变性,但由于孵育时间不够长,细胞并没有开始坏死;OA可诱导NG108-15细胞tau蛋白过度磷酸化。②20 nmol/L OA孵育NG108-15细胞,同时观测细胞中Ser396位点磷酸化tau蛋白水平和PTEN蛋白水平。随OA作用时间的变化,可见Ser396位点磷酸化tau蛋白水平变化同上, PTEN蛋白水平则于12 h、18 h、24 h显著升高,18 h达高峰,其余时间点未见显著变化,提示在OA诱导NG108-15细胞AD样发生过程中,PTEN蛋白水平升高。结论1. OA可诱导SH-SY5Y细胞、NG108-15细胞进行性损伤变性和tau蛋白过度磷酸化,这些细胞模型可用于AD研究。2.在OA诱导SH-SY5Y细胞以及NG108-15细胞AD样发生过程中,PTEN蛋白水平升高,提示PTEN在实验性AD诱导产生中可能存在促进作用。