乙酰胆碱及M型乙酰胆碱受体在脓毒症大鼠心肌损伤中的作用研究

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目的通过盲肠结扎穿孔法(CLP)建立SD大鼠脓毒症动物实验模型,探讨乙酰胆碱及M型乙酰胆碱受体在脓毒症6h大鼠心肌损伤中的水平变化及作用,从而为临床脓毒症伴发心肌损伤的患者治疗提供理论依据。方法将36只清洁级雄性SD大鼠随机分为3组:正常对照组(12只)、假手术组(12只)、CLP组(12只)。正常对照组:不作任何处理;假手术组:只开腹,关腹,不结扎和穿孔盲肠;CLP(脓毒症)组:行盲肠结扎穿孔手术。观察每组大鼠一般情况:包括肛温、心率和呼吸频率。造模后6h留取血液标本,并迅速取出心脏切取心室肌,作为病理形态学标本,其余心肌组织作为检测标本。应用酶联免疫吸附剂方法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测大鼠血清肌钙蛋白T(cTnT)的浓度、全自动生化仪测定肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)的浓度。将大鼠心肌组织标本制作成组织匀浆,应用酶联免疫吸附剂法检测其中乙酰胆碱及M型乙酰胆碱受体水平的变化。将病理标本分为两组,一组进行HE染色,观察心肌组织大体病理改变;另一组制作电镜切片,电镜下观察组织超微结构的变化,并按Flameng分级方法对心肌线粒体进行半定量评分。对测得的数据结果采用SPSSl8.0统计软件包进行数据处理,所有数据均采用均数±标准差表示,多个样本均数比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA),P<0.05差异有统计学意义。结果1CLP组大鼠造模6h后出现心率、呼吸显著加快,体温上升及嗜睡等不同程度的脓毒血症表现。正常对照组、假手术组未见相关症状出现。2实验测得CLP组血清肌钙蛋白T(cTnT)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)及乙酰胆碱浓度水平与假手术组、正常对照组比较,cTnT(7.62±0.62vs1.34±0.21vs1.16±0.18, P<0.05), CK-MB (1541.23±237.58vs323.68±59.58vs250.67±45.80,P<0.05),CK(1879.45±356.80vs358.32±67.90vs285.78±34.79,P<0.05),Ach(678.4±99.62vs323.23±53.50vs318.58±44.85,P<0.05),有显著升高,差异具有统计学意义。M型乙酰胆碱受体水平(241.20±27.56vs250.80±23.78vs247.56±26.52,P>0.05)与假手术组及正常对照组比较无明显变化。3CLP组大鼠心肌标本HE染色显示心肌细胞水肿,炎症细胞浸润,正常对照组及假手术组未见相关病理学改变;CLP组电镜下可见心肌线粒体肿胀、脊排列紊乱部分脊断裂,线粒体空泡化;与正常对照组、假手术组心肌线粒体半定量评分明显升高(P<0.05)。结论1脓毒症6h心肌损伤标志物血清肌钙蛋白T(cTnT)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)浓度均升高,与对照组比较有统计学意义。2脓毒症6h心肌病理组织学大体结构和超微结构都出现了明显的损伤表现,证明脓毒症早期存在心肌损伤。3脓毒症所致的心肌组织乙酰胆碱水平升高在脓毒症心肌损伤的发生发展过程中起到了重要的作用。4脓毒症心肌组织受损后6h内,心肌组织M型乙酰胆碱受体水平未见明显变化,脓毒症对心肌组织M型乙酰胆碱受体水平的长期影响有待进一步研究。
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