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埃博拉病毒病(Ebola virus disease, EVD)是由埃博拉病毒(Ebola virus, EBOV)引起的一种急性烈性传染病。该病具有传染性强、致死率高等特点,属于高危病原,目前尚无批准的诊断试剂和疫苗。EBOV能够以气溶胶和接触等方式传播,加上近年来生态环境的变化和国际间交流频率的增加给它的传播提供了便利条件,随时有可能传入我国。因此,急需研制EBOV快速诊断方法和疫苗。第一部分：建立了埃博拉病毒病核酸检测与分型的方法。本研究针对扎伊尔型埃博拉病毒和苏丹型埃博拉病毒糖蛋白(GP)设计了通用引物和探针,一次反应即可实现两种致死型埃博拉病毒检测与分型,检测灵敏度为102FFU/ml。第二部分：建立EBOV假病毒中和试验的方法。为安全评价抗体中和效价和避免自然病毒EBOV作为中和试验所潜在的生物安全隐患,本研究利用VSV病毒包装系统和EBOV的结构蛋白构建了假病毒。假病毒鉴定结果显示获得的假病毒形态、结构与文献报道的VSV具有一致性,并且,EBOV假病毒的感染能力能被EBOV的抗体所特异性抑制,在此基础上,利用假病毒建立了检测EBOV抗体中和试验,检测结果表明该方法能安全检测抗体的中和效价。第三部分：EBOV病毒样颗粒疫苗的构建、鉴定与实验免疫研究。近些年,病毒样颗粒作为新型疫苗已展示出许多独特的优点,具有良好的应用前景。本研究利用杆状病毒表达系统,构建了共表达EBOV结构蛋白GP和VP40的重组杆状病毒AcMNPV-GP-VP40,重组病毒感染Sf9细胞后可正确装配成EBOV VLPs,并分泌至细胞上清。EBOV VLPs免疫小鼠之后,能够有效诱导小鼠T淋巴细胞活化、刺激小鼠血清中产生高水平的细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α和中和抗体；VLPs能够诱导猴产生中和抗体。因此,表明EBOV VLPs具有较强的免疫原性。第四部分：制备精制免疫球蛋白。以EBOV VLPs作为抗原配以不同的佐剂免疫马匹,采集高免血清,在GMP条件下制备马抗EBOV的精制免疫球蛋白,免疫球蛋白中和抗体效价达1：20000以上,F(ab’)2纯度在90%以上。综上所述,本研究建立了致死型埃博拉病毒的核酸快速检测方法；利用杆状病毒表达系统制备了EBOV VLPs,具有疫苗的潜力；制备的精制免疫球蛋白纯度高、效价高,为EVD的综合防控奠定了基础。