[目的]建立以及鉴定转基因细胞L02/HBX ,在获得阳性克隆细胞后,通过RT-PCR,western-blot对PDCD5的mRNA与蛋白的检测,研究乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein, HBx)对凋亡蛋白PDCD5的表达。[方法](1)复苏及培养L02细胞,应用G418筛选L02细胞,得到细胞最低致死浓度。(2)建立转染HBx基因的L02 (L02/HBX)细胞系,并通过RT-PCR,western-blot进行鉴定,确定HBx基因转染成功。(3)通过Real-time PCR和Western Blot检测转染HBx基因后PDCD5mRNA和蛋白表达;[结果](1)复苏并培养L02细胞,经G418筛选得知,当G418浓度在500-700ug/ml时,L02细胞全部死亡;当G418浓度在500ug/ml以下时,L02细胞均可存活。所以经过试验得出L02细胞的最低致死浓度为500ug/ml。(2)将HBx基因转入L02肝细胞中,以500ug/ml G418筛选出转染HBx的阳性克隆L02细胞。以RT-PCR和western-blot检测HBx mRNA和蛋白的表达,确保成功建立转染HBx基因的L02 (L02/HBX)细胞系。(3)转染HBx基因的L02细胞中PDCD5 mRNA和蛋白中的表达水平上调。[结论]HBx上调凋亡蛋白PDCD5的表达进一步显示了其同细胞凋亡的关系是非常复杂的,可能对细胞凋亡具有双重调节作用。