背景:非编码RNA是指一类不编码蛋白质的RNA,包括miRNAs(microRNAs,微小RNAs),piRNAs(piwi蛋白相互作用的RNAs),lncRNAs(long Non-coding RNAs,长链非编码RNAs),snoRNAs(small nucleolar RNAs,核糖体小RNAs)等,研究表明,这些非编码RNA不仅在正常的生长发育和生理过程中发挥重要作用,而且与多种疾病的发生发展密切相关。近几年lncRNAs的作用机制和功能受到了广泛关注,研究发现,lncRNAs在维持基因组稳定性过程中起到重要作用。维持基因组的稳定性是细胞发挥正常功能及维持生命的必要条件。目前已经发现多种可以对DNA造成损伤的因素存在于生物体内部或外部环境中,这些因素会破坏基因组的稳定性,甚至导致疾病的发生。DNA损伤修复能有效维持基因组稳定性,保持基因编码信息不变。若损伤的DNA未被及时修复,会造成维持基因组稳定性的重要因子的功能缺失,从而引起基因组的不稳定性和基因突变,造成肿瘤抑制基因和致癌基因的突变积累,导致细胞生长增殖失调等细胞生理现象,最终引发癌症。研究表明,p53是DNA损伤应答(DNA Damage Response,DDR)通路中重要的肿瘤抑制因子,可以维持基因组的稳定性,避免突变发生,并在抑制肿瘤细胞生长、DNA损伤修复以及诱导细胞凋亡等过程中占据重要地位。在DNA损伤应激条件下,转录因子p53可以激活引起细胞周期阻滞的基因或使受损伤的细胞发生凋亡,因而维持了细胞的稳定性。近年来研究显示,lncRNAs可以维持基因组稳定性,并在此过程中发挥重要的功能,尤其是在p53影响DNA损伤应答信号通路中发挥了重要的功能,如Hall等人在小鼠细胞内发现lincRNA-p21可以通过影响辅抑制物p21的表达,最终引起p53依赖的DNA损伤后凋亡。基于p53在肿瘤的发生发展中的重要作用,参与p53信号通路lncRNAs的表达和功能逐渐被人们所关注。根据已有的研究,发现lncRNAs参与p53相关的DNA损伤应答通路主要通过两种机制,一方面,lncRNAs通过与染色质调控因子相互作用介导转录抑制;另一方面,lncRNAs通过与组蛋白修饰激活因子结合来促进转录激活。由于lncRNAs在DNA损伤应答通路中起到至关重要的作用,研究者们使用不同的策略获得lncRNAs,并对它们表达水平进行分析,进一步研究lncRNAs在DNA损伤应答过程中的功能。通过组蛋白修饰、染色质调控因子和转录因子结合分析,可以对lncRNAs的功能进行初步分析。有研究表明,果蝇中的Dmp53与人类的p53同源,保守性极高。到目前为止,在生物体水平还缺少对lncRNAs作用机制的研究,并缺少在模式生物果蝇的功能分析和机制研究,在果蝇中已有的Ch IP-seq数据也尚未整理分析。我们通过RNA-seq技术分析了果蝇中依赖p53的与DDR相关的lncRNAs,根据已有的ChIP-seq数据库中数据信息进行统计分析,建立果蝇的ChIP-seq公共数据集,为深入研究lncRNAs的功能和作用机制提供了数据基础。目的:获得果蝇中与p53相关的、参与DNA损伤应答的lncRNAs,分析已有的ChIP-seq数据信息,建立果蝇中的ChIP-seq公共数据库。方法:1.将野生型和p53缺失型果蝇胚胎经过DNA损伤处理,提取RNA,进行RNA-seq测序。2.对RNA-seq数据进行分析,获得DNA损伤应答过程中差异表达的lncRNAs.3.搜集已有的ChIP-seq数据,将已有的数据进行归纳分类,得到系统的ChIP-seq数据体系。4.构建差异表达lncRNAs的突变gRNA质粒。结果和结论:通过对RNA-seq数据的分析,获得了169个DNA损伤应答中差异表达的lncRNAs;运用qPCR技术对差异表达的lncRNAs表达数据进行验证;构建了差异表达lncRNAs的gRNA质粒,用于建立突变果蝇,进行体内功能研究;收集已有的Ch IP-seq数据,对数据信息进行归纳分析,建立以果蝇为模式生物的ChIP-seq公共数据集。