动脉导管未闭(patent ductus arteriosus,PDA)是一类婴幼儿常见的先天性心血管发育畸形病,在足月活产新生儿中的发病率约为0.5‰,是人类重大先天性疾病之一,严重威胁着人类生命健康。TFAP2B(transcription factor AP-2 beta)是神经嵴来源的特异性转录因子,能够促进下游靶基因的转录,调控心肌细胞结构蛋白或心脏相关基因蛋白的表达,参与细胞周期调控、神经嵴细胞分化等过程,最终促进动脉导管的闭合。近年来,国内外学者关于TFAP2B与PDA的相关性研究主要在TFAP2B的转录激活区、DNA结合区和二聚化区,而针对TFAP2B核定位信号区的突变分析较少,本课题首次对TFAP2B的核定位信号突变进行了研究。首先我们分析筛选了 TFAP2B SNP位点,得到TFAP2B 三个点突变 A275D(rs80338914)、R285Q(rs80338915)、R300C(rs80338917),单荧光素酶报告实验分析表明A275D、R285Q、R300C突变显著下调TFAP2B的转录活性。通过对TFAP2B物种之间的同源性分析和转录因子AP2家族成员之间的同源性分析以及在线网站NLStradamus预测,成功得到TFAP2B核定位信号区的结构序列,并发现A275D、R285Q、R300C突变位于TFAP2B的核定位信号区。我们进一步通过细胞免疫荧光染色和细胞核、质蛋白Western blotting,证实了 A275D、R285Q、R300C 突变改变了 TFAP2B 蛋白在细胞中的定位,说明这3个突变确实位于TFAP2B的核定位信号区。通过单荧光素酶报告实验发现,在A275D、R285Q、R300C突变定量的情况下,提高TFAP2B的转录辅助激活因子CITED2的剂量并不能增强A275D的转录活性,而R285Q、R300C突变的TFAP2B转录活性会随着CITED2的剂量的增加而有所提高,说明CITED2在一定程度上可以激活恢复TFAP2B的转录活性。与此同时,我们还用单荧光素酶报告实验,证实了提高A275D、R285Q、R300C突变的剂量会改变WTTFAP2B的转录活性,表明A275D、R285Q、R300C突变可能会对WTTFAP2B产生显性负调控作用。接下来,我们又用实时荧光定量PCR检测到A275D、R285Q、R300C突变改变了 TFAP2B下游与 PDA 相关基因(CACNA1G,CACNB2,KCNA2,BMP2,BMP4,Et-1,ERBB3)的mRNA表达水平,而这些相关基因的mRNA水平产生的上调或下调的变化,会导致这些基因所在的信号通路产生异常,最终引发PDA。以上所有结果可以为阐明PDA的发生机理提供了一定的理论依据。