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目的:肺癌作为恶性肿瘤之首,其发病机制尚未明确,本研究旨在探究维甲酸β受体甲基化在非小细胞肺癌进展过程中的作用,为进一步明确维甲酸β受体在非小细胞肺癌中的作用机制提供理论基础和实验依据。方法:1.采用荧光定量PCR实验检测RAR-β基因在肺癌患者癌旁组织和癌组织中的表达水平;免疫组织化学检测RAR-β蛋白在临床肺癌组织中的表达情况。2.构建肺癌原位癌小鼠模型;蛋白免疫印迹和酶联免疫吸附试验检测RAR-β蛋白在瘤体组织中的表达情况;酶联免疫吸附试验检测DNMT3B蛋白在小鼠瘤体组织中的表达水平。3.采用Illumina Infinium Methylation EPIC(850K)BeadChip芯片筛选正常肺上皮细胞(BEAS-2B)和非小细胞肺癌细胞(A549、SW-900和NCI-H520)中差异表达的甲基化位点;利用the Database for Annotation,Visualization and Integrated Discovery v6.7生物信息数据库分析筛选出基因并绘制基因通路图,找出特异性甲基化位点;实时荧光定量PCR检测RAR-β基因在正常肺上皮细胞和肺癌细胞中的表达情况;蛋白免疫印迹验证RAR-β蛋白在细胞中的表达;蛋白免疫印迹检测DNMT3B蛋白在细胞中的表达;甲基化特异性PCR验证RAR-β关键甲基化位点在细胞中的甲基化状态。结果:1.收集55例肺癌患者肺癌与癌旁组织标本,组织总RNA实时荧光定量PCR结果显示,与癌旁组织相比,肺癌组织中的RAR-β基因表达明显降低(P<0.01);制作肺癌石蜡切片100张,免疫组化结果显示,在癌旁组织中细胞核呈深棕色的数目较肺癌组织多,RAR-β定位于细胞核内,且肺癌组织中RAR-β蛋白的表达明显低于癌旁组织。2.小鼠肺癌模型建模成功,小鼠肿瘤肺组织石蜡切片HE染色见组织中有肿瘤细胞浸润,呈肺腺癌样改变;取6对小鼠肺癌组织和癌旁组织提取总蛋白进行蛋白免疫印迹实验,结果显示:与癌旁组织相比,RAR-β蛋白在肺癌组织中低表达(P<0.001);RAR-β蛋白酶联免疫吸附试验结果显示:与癌旁组织相比,RAR-β蛋白在肺癌组织中低表达(P<0.05),DNMT3B蛋白在小鼠瘤体组织中的表达量较癌旁组织高(P<0.001)。3.通过Illumina 850K芯片测得差异甲基化位点总数为199 492个,相关基因1 675个;分析基因通路图发现RAR-β高甲基化可能参与肿瘤增殖过程;实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验结果显示RAR-β在非小细胞肺癌中低表达;肺癌细胞体外实验结果表明,与BEAS-2B相比,DNMT3B蛋白在A549、SW-900和NCI-H520中高表达(P<0.01);结合甲基化芯片分析筛出RAR-β启动子区差异位点71个,其中部分重要甲基化位点cg23302436、cg06905304呈高甲基化,同时甲基化特异性PCR验证结果显示RAR-β部分重要甲基化位点在非小细胞肺癌细胞中呈高甲基化状态。结论:1.维甲酸β受体在非小细胞肺癌中呈高甲基化状态、低表达水平。2.DNMT3B在非小细胞肺癌中高表达,可能通过诱发RAR-β甲基化位点高甲基化从而使RAR-β表达下调,与非小细胞肺癌进展密切相关。3.RAR-β启动子区关键位点cg23302436、cg06905304可能在非小细胞肺癌的表观遗传调控过程中起重要作用,RAR-β启动子区特异性甲基化位点可作为一种潜在的肺癌药物靶点。