胰高血糖素样肽-1由肠道L细胞合成和分泌的一个30个氨基酸的多肽,它不仅能刺激胰岛β细胞增殖、抑制β细胞凋亡,而且延缓胃排空和抑制食欲。但其在体内的半衰期只有2~6 min,大大限制了其应用。为克服GLP-1半衰期短的缺点,实现其在体内的长效作用,本实验室成功构建了胰高血糖素样多肽-1(GLP-1)与人血清白蛋白的融合体(GGH),本文对表达成功的融合蛋白GGH进行分离纯化的优化和药效学初步评价,主要结论如下:融合蛋白GGH分离纯化步骤:发酵液8000 r/min离心8 min,0.65μm的微滤膜微滤,采用截留分子量为10 kDa的超滤膜超滤20倍,依次经过Blue Sepharose 6 Fast Flow、Phenyl Sepharose Fast Flow、Q Sepharose Fast Flow、Sephadex G-25层析柱,得到的目的蛋白经过HPLC和SDS-PAGE检测纯度达到98.48%以上,回收率为28.9%,内毒素含量10 EU/mg。口服糖耐量实验,评价融合蛋白GGH的最小有效量、最大剂量的耐受性、静脉注射给药时的量-效关系,皮下注射给药时的量-效和时-效关系。静脉给药在剂量1.0 mg/Kg~6.0 mg/Kg范围内、皮下注射给药GGH(2.0、4.0、6.0 mg/Kg)做量-效关系的对数曲线,成线性关系;提前8 h皮下注射给药降低葡萄糖负荷后血糖升高的量-效关系最好。融合蛋白GGH对C57BL/6小鼠β细胞损伤模型和正常C57BL/6小鼠胃排空模型进行药效学初步评价。与模型对照组相比,融合蛋白GGH(2.0、6.0、18.0 mg/Kg)可以显著提高β细胞损伤模型小鼠的胰岛素水平;降低小鼠的饮食量、饮水量和尿量;促进肝/肌糖原的合成,降低血糖水平;免疫组化结果显示融合蛋白GGH可以促进胰岛β细胞的增殖、刺激胰岛素的表达、抑制胰高血糖素的表达。融合蛋白GGH(2.0、4.0、6.0 mg/Kg)可以显著降低正常C57BL/6小鼠的胃排空和延缓肠推进。