Lipo-PGE1持续低温灌注对大鼠移植肾热缺血影响的实验研究

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目的:通过建立大鼠颈部肾移植模型来探讨前列地尔持续低温灌对大鼠移植肾热缺血的保护性作用及相关机制,为前列地尔应用于临床器官保存提供实验依据。方法:选用近交系SD大鼠作为实验研究对象,均为雄鼠,体重均为250-300g。采用完全随机设计(随机数字表法)将80只供体SD大鼠均分为对照组(A组)、实验组(B组)2组,每组又分为术后1天、3天、5天和7天组等4个时间点进行检测。两组大鼠肾脏均热缺血45min后持续4℃环境下灌注2h。灌注后,将供肾进行颈部肾移植手术并摘除受体双肾。对照组:灌注液为高渗枸橼酸盐腺嘌呤溶液(HC-A)肾保存液+生理盐水;实验组:灌注液为高渗枸橼酸盐腺嘌呤溶液(HC-A)肾保存液+Lipo-PGE1。术后清洁级环境饲养,于术后1天、3天、5天、7天采集颈静脉血样采用全自动生化分析仪检测血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血清肌酐(serum creatmne,SCr)含量,采血后处死并取肾脏组织。采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定肾脏组织8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy—2 deoxyguanosine,8-OHDG)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,免疫印迹法(western blotting,WB)检测肾组织细胞凋亡标志酶caspase-3和低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-lalpha,HIF-1α)表达情况;肾组织HE染色后观察病理形态学。得到数据后使用SPSS18.0软件对数据进行处理与分析。结果:1、肾功能两组大鼠血清BUN浓度均呈上升趋势,且两组术后1、3、5天均进行组内对比,差异有统计学意义(P<0.05),术后5、7天对比均无显著差异(P>0.05);术后各时间点进行组间比较,B组显著低于A组(P<0.05)。两组大鼠血清Cr浓度随时间延长均呈显著上升趋势(P<0.05),均于术后7天达到高峰;两组同时间点进行组间比较,B组均显著低于A组(P<0.05)。2、肾组织形态学改变A、B组光镜观察病理形态学上差异较显著。A组肾小球体增大,肾小球毛细血管轮廓模糊,肾小囊腔变小,较多肾小管上皮水肿变性或坏死,胞浆内红染的颗粒数目明显增多,且颗粒增粗,部分管腔内可见管型。B组肾小球体稍增大,肾小球毛细血管轮廓较清晰,肾小囊腔减小不明显,小部分肾小管上皮细胞水肿变性或坏死,胞浆内红染的颗粒数目有所增多,但颗粒未见增粗,少量管腔内可见红细胞管型,肾小管上皮细胞无破碎、坏死现象。3、肾组织8-OHDG和MDA的含量两组8-OHDG含量在再灌注后随着时间延长均呈逐步上升的趋势;两组术后同时间点组内比较,B组于术后各相邻时间点的8-OHDG含量并无显著性变化(P>0.05);而A组于术后第1天和第3天、第3天和第5天的8-OHDG含量变化显著(P<0.05)。两组于术后第1、3、5、7天进行组间比较,B组的8-OHDG含量均较A组有显著性下降(P<0.05)。两组MDA含量在术后1、3、5天均呈逐步上升的趋势,且均于术后第5天达到顶峰,随后均有不同程度下降。B组的MDA含量在术后第1、3、5、7天均显著低于A组(P<0.05);组内比较,B组的MDA含量在术后第7天较第5天时显著下降(P<0.05),而A组的MDA含量在术后第7天较第5天时比较无显著性差异(P>0.05)。4、肾组织caspase-3与HIF-1α蛋白相对表达量两组术后1、3、5、7天进行组间比较,B组的caspase-3表达水平均显著低于A组(P<0.05);A组的caspase-3表达水平术后呈逐渐上升的趋势,并于术后第5天达到峰值,随后第7天出现缓慢下降,术后1、3、5天进行组内比较均有显著性差异(P<0.05),而第5天与第7天比较差异不明显(P>0.05)。B组的caspase-3表达水平于术后第3天达到最高值,随后第5、7天均显著性下降(P<0.05)。两组术后HIF-1α表达水平随时间延长,均呈下降趋势,但两组术后1、3、5、7天进行组间比较,B组的HIF-1α表达水平均显著低于A组(P<0.05)。结论:1.含脂质体前列地尔的HC-A肾保液可能是通过减轻氧自由基诱发的脂质过氧化损伤及DNA氧化损伤,减轻肾小管上皮细胞的损伤及坏死,来提高热缺血肾脏保存质量,从而改善大鼠移植肾功能。2.氧化应激反应及肾小管上皮细胞凋亡在大鼠移植肾缺血再灌注损伤机制中起着重要作用。
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