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目的:以重组人白细胞介素-24(recombinant human interleukin-24,rhIL-24)联合5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)作用于乳腺癌MDA-MB-157细胞,研究白细胞介素-24(interleukin,IL-24)单一用药和联合5-FU用药对乳腺癌细胞的抑制效应,检测肿瘤细胞凋亡,探讨联合用药抗肿瘤机制,为rhlL-24联合5-FU的体内实验和临床应用提供理论指导。
方法:(1)将100μl浓度为104个细胞/ml的MDA-MB-157细胞和浓度为2×104个细胞/ml的WI-38细胞分别加入96孔板,前者在37℃、无CO2,饱和湿度;后者在37℃、5%CO2,饱和湿度条件下,培养24小时,弃上清,分别加入rhIL-24浓度分别为80ng/ml;100ng/ml;120ng/ml;150ng/ml;200ng/ml,5-Fu浓度分别为:5μg/ml;10μg/ml;25μg/ml;50μg/ml;75μg/ml,在同样条件下继续培养24小时,48小时,72小时;以CCK-8法检测细胞增殖,绘制生长曲线,计算生长抑制率。(2)将100μl浓度为104个细胞/ml的MDA-MB-157细胞和浓度为2×104个细胞/ml的WI-38细胞分别加入96孔板,前者在37℃、无CO2,饱和湿度条件下,后者在37℃、5%CO2、饱和湿度条件下,培养24小时,弃上清,加入120ng/ml的rhIL-24联合10μg/ml的5-Fu,分别在24小时,48小时,72小时,以CCK-8法检测细胞增殖,绘制生长曲线,计算生长抑制率。(3)将100μl浓度为104个细胞/ml的MDA-MB-157细胞和浓度为2x104个细胞/ml的WI-38细胞分别加入6孔板,前者在37℃、无CO2、饱和湿度条件下,后者在37℃,5%CO2、饱和湿度条件下,培养24小时,弃上清,分别加入120ng/ml的rhIL-24,10μg/ml的5-Fu及120ng/ml的rhIL-24联合10μg/ml的5-FU各三个实验组,培养24小时,收集细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡。(4)将收集的细胞同时AnnexinV-FITC染色,在荧光显微镜下观察MDA-MB-157细胞和WI-38细胞的凋亡形态学变化。
结果:
(1)药物抑制浓度:rhIL-24对MDA-MB-157细胞的最适抑制浓度是120ng/ml,5-Fu对MDA-MB-157细胞的最适浓度是10μg/ml;rhIL-24对WI-38细胞无抑制作用,5-Fu对WI-38细胞的最适浓度是10μg/ml。
(2)联合抑制作用:联合组作用MDA-MB-157细胞在24小时,48小时,72小时的抑制率分别是:28.2%,36.5%,44.7%。联合组作用WI-38细胞在24小时,48小时,72小时的抑制率分别是:5.4%,25%,68.7%。
(3)细胞凋亡率:MDA-MB-157细胞,rhIL-24组细胞凋亡率14.9%,5-Fu组细胞凋亡率20.2%,联合组细胞凋亡率26.1%;WI-38细胞:rhIL-24组细胞凋亡率6.8%,5-Fu组细胞凋亡率28.1%,联合组细胞凋亡率24.1%。
(4)细胞凋亡形态观察:rhIL-24或(和)5-FU作用MDA-MB-157细胞24小时,联合组可见胞体固缩和凋亡小体细胞。
结论:
(1)rhIL-24对MDA-MB-157细胞具有抑制作用,其最适抑制浓度为120ng/ml,rhIL-24对WI-38细胞无明显抑制作用。
(2)5-Fu对MDA-MB-157细胞和WI-38细胞的抑制作用与浓度呈正相关,存在时间依赖性,表明5-Fu对正常细胞也有细胞毒作用。
(3)rhIL-24联合5-Fu抑制细胞生长作用比单一药抑制作用更强,表明联合用药具有协同作用。
(4)单用rhIL-24或rhIL-24联合5-Fu通过诱导细胞凋亡发挥抗肿瘤效应。