【摘 要】
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目的:卵巢储备功能减退（DOR）是女性不孕不育的主要原因之一。DOR患者中卵巢内储备的卵泡数量减少,卵母细胞质量下降。卵母细胞发育依赖于颗粒细胞,颗粒细胞被认为是评估卵母细胞质量的最佳非侵入性方法。线粒体是胞质中最重要的细胞器之一,除供给细胞增殖、代谢所需的能量外,还可以调控抗氧化、细胞凋亡及自噬等重要生理过程。研究发现,颗粒细胞线粒体DNA（mt DNA）拷贝数与卵母细胞mt DNA拷贝数成正比
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目的:卵巢储备功能减退（DOR）是女性不孕不育的主要原因之一。DOR患者中卵巢内储备的卵泡数量减少,卵母细胞质量下降。卵母细胞发育依赖于颗粒细胞,颗粒细胞被认为是评估卵母细胞质量的最佳非侵入性方法。线粒体是胞质中最重要的细胞器之一,除供给细胞增殖、代谢所需的能量外,还可以调控抗氧化、细胞凋亡及自噬等重要生理过程。研究发现,颗粒细胞线粒体DNA（mt DNA）拷贝数与卵母细胞mt DNA拷贝数成正比,颗粒细胞线粒体与卵母细胞发育息息相关。我们通过检测DO R患者卵丘颗粒细胞（cGCs）线粒体结构和功能的变化,探究DOR患者颗粒细胞线粒体质量下降的原因及机制。方法:1.卵丘颗粒细胞培养72h后,HE染色观察卵巢储备功能减退组（DOR组）和卵巢储备功能正常组（NOR组）细胞形态;2.透射电镜观察两组细胞的线粒体超微结构;3.细胞荧光染色比较两组细胞线粒体数量、线粒体膜电位（MMP）和活性氧（ROS）水平;4.ATP试剂盒测定两组细胞ATP合酶基因水平;5.Real-time PCR技术检测两组细胞的mt DNA拷贝数;6.q RT-PCR技术检测ATP合酶基因、线粒体动力学蛋白m RNA水平、线粒体生物发生相关通路蛋白m RNA水平表达;7.琼脂糖凝胶电泳检测线粒体DNA常见缺失（4977bp）;8.蛋白免疫印迹技术（WB）检测两组细胞的线粒体动力学蛋白和相关通路蛋白表达水平。结果:1.NOR组与DOR组患者临床结局有差异,DOR组患者的平均年龄、基础卵泡刺激素（FSH）显著高于NOR组,窦卵泡计数（AFC）显著低于NOR组,DOR患者的MII率、2PN率和优质胚胎率显著低于NOR组;2.NOR组cGCs核仁完整,伪足长,DOR组cGCs核仁分散,伪足短;3.DOR组cGCs线粒体超微结构异常较多;4.两组细胞mt DNA拷贝数无统计学差异,且均无4977bp缺失;5.DOR组cGCs ROS水平显著高于NOR组;6.DOR组cGCs MMP水平显著低于NOR组;7.DOR组cGCs线粒体分裂融合蛋白表达异常,动力学系统紊乱;8.DOR组cGCs ATP水平显著低于NOR组,且ATP5A1基因表达显著性降低;9.DOR组cGCs在SIRT1/AMPK-PGC-1α-TFAM通路中,蛋白表达和m RNA水平表达均显著降低。结论:1.DOR组患者cGCs的线粒体质量下降;2.cGCs线粒体质量下降的原因可能是线粒体生物发生障碍;3.DOR组患者cGCs线粒体功能障碍可能与SIRT1/AMPK-PGC-1α-TFAM通路异常有关。
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