【摘 要】
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糖尿病并发皮肤溃疡是一种严重的不易治愈的糖尿病并发症，研究表明同时使用调节血糖的胰岛素和促进创伤愈合药物有利于治愈该并发症。新型抗糖尿病药物Exendin-4(以下简写为Ex
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糖尿病并发皮肤溃疡是一种严重的不易治愈的糖尿病并发症，研究表明同时使用调节血糖的胰岛素和促进创伤愈合药物有利于治愈该并发症。新型抗糖尿病药物Exendin-4(以下简写为Exn-4)和促进创伤愈合因子胸腺素β4(以下简写为Tβ4)是分别由39个氨基酸和43个氨基酸组成的小肽，本研究以二者为融合蛋白单体，并在其间引入凝血酶Xa因子切割位点(Ile-Glu-Gly-Arg)，以期在伤口凝血酶作用下，Exn-4-Tβ4融合蛋白能自动裂解成分别产生降血糖和皮肤创伤修复功能的Exn-4和Tβ4单体来发挥作用，从而达到同时治疗糖尿病及其皮肤溃疡并发症的效果。通过重叠PCR技术获得融合蛋白基因Exn-4-Tβ4，并将此融合基因进行克隆和原核表达，最后制备出纯化融合蛋白，为下一步的糖尿病和其并发症皮肤溃疡治疗效果实验奠定基础。
利用经过重叠PCR扩增得到的融合基因Exn-4-Tβ4，构建了分泌型表达载体pET22b-Exn-4-Tβ4和融合表达载体pET32a-Exn-4-Tβ4，经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21(DE3)中进行目的蛋白的表达，经金属亲和层析、透析除盐、肠激酶酶切后，进行冷冻干燥，制备出纯化融合蛋白。
对构建的重组载体pET22b-Exn-4-Tβ4和pET32a-Exn-4-Tβ4分别进行分泌型和融合型表达，结果表明用pET32a-Exn-4-Tβ4重组载体得到较理想的可溶性蛋白，SDS-PAGE分析显示目的蛋白大小与预期理论值一致。因此，pET32a-Exn-4-Tβ4重组载体可以用于融合蛋白Exn-4-Tβ4的规模制备，为治疗糖尿病及其并发症皮肤溃疡提供候选药物蛋白。
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