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目的:成功构建SCID/Beige裸鼠人结肠癌二次成瘤动物模型,为结肠癌复发、转移的研究提供可靠的模型动物,研究脐带血来源的特异性DC疫苗对二次成瘤的抑制作用。方法:取健康成人外周血,利用密度梯度离心法获取单核细胞后诱导生成DC细胞;取健康足月产孕妇脐带血,采用磁珠分选法分离纯化CD34+造血干细胞,进一步诱导生成DC细胞。观察DC细胞的形态学变化,并分别于第0、3、5、7天用流式细胞术(FCM)检测两种来源DC细胞的表面分子CD80、CD83、CD86、HLA-DR的表达水平;将两种来源DC细胞负载人结肠腺癌SW-1116抗原制备成特异性DC疫苗;将健康雄性SCID/Beige裸鼠随即分为4组:空白组、阴性组、实验对照组、实验组。将人SW-1116结肠癌细胞接种于裸鼠右侧腋下,构建初次荷瘤动物模型。空白组无预先处理,实验组、实验对照组及阴性组确定成瘤后(初次种瘤后第5天)自鼠尾静脉注入健康成人外周血PBMC进行人体免疫重建,在免疫重建后第3天实验组给予脐带血特异性DC疫苗尾静脉注射(即CB-DC-VAC组),实验对照组给予外周血特异性DC疫苗尾静脉注射(即PB-DC-VAC组),阴性组给予外周血没有负载抗原的DC尾静脉注射(即PB-DC组);注射疫苗后24小时在荷瘤裸鼠左侧腋下接种人SW-1116细胞,观察不同荷瘤组裸鼠二次荷瘤后的成瘤时间,记录双侧肿瘤体积变化,绘制肿瘤生长曲线,初次种瘤后第27天处死小鼠,取得瘤体称重,行统计学分析处理。结果:1脐带血、外周血DC成熟过程中形态学的变化分血当天细胞为圆形或椭圆形;第3天可见细胞出现突起及毛刺,外周血DC有较长的细胞突起且有梭型外观,脐带血DC的细胞突起较短但数量较多;第5天,外周血DC细胞突起更加明显,窄且笔直,而脐带血DC的细胞突起则更加密集;第7天,负载抗原成熟后,两种DC均呈悬浮生长,类圆形,无树突状结构。2脐带血、外周血DC成熟过程中表型的变化未成熟时,外周血DC表面CD80、CD83、CD86、HLA-DR的表达水平呈逐渐升高趋势,但CD80的表达较后三者明显偏低。脐带血DC表面的CD80、CD83,CD86和HLA-DR表达水平均随着培养时间的延长逐渐上调。两种来源DC成熟后,以上四种标志物的表达水平均显著高于期成熟前(P<0.05)。且脐带血DC在各阶段表达均显著高于外周血(P<0.05)。3小鼠的荷瘤情况和一般状况小鼠初次及二次荷瘤成功后,经右侧及左侧腋下均可触及约绿豆大小肿瘤,并突出皮表。将小鼠处死后取双侧肿瘤进行HE染色,见组织细胞排列成不规则腺体状,有核分裂相。四组小鼠均未见腹泻、自然死亡等表现,空白组小鼠随荷瘤时间延长,精神、活跃度变差;阴性组及实验对照组偶有弓背、翘毛表现;实验组小鼠精神、进食、活跃度未见明显异常。4小鼠肿瘤的生长情况小鼠右侧(初次荷瘤)肿瘤生长曲线显示,空白组肿瘤生长迅速,PB-DC组、PB-DC-VAC组、CB-DC-VAC组肿瘤生长受到不同程度抑制,其中CB-DC-VAC组肿瘤生长最为缓慢,PB-DC-VAC组与PB-DC组相比差异不大。左侧(二次荷瘤)肿瘤生长曲线显示,空白组不能抑制肿瘤生长,PB-DC组、PB-DC-VAC组、CB-DC-VAC组肿瘤生长受到不同程度抑制,且与空白组相比有显著性差异(P<0.05);其中CB-DC-VAC组肿瘤生长受到明显抑制,瘤体出现延迟,在二次荷瘤后第13天长出肿瘤;CB-DC-VAC组对肿瘤生长抑制作用强于PB-DC-VAC组和PB-DC组,差异有统计学意义(P<0.05);PB-DC-VAC组在二次荷瘤后约第10天长出肿瘤,PB-DC组在二次荷瘤后约第8天长出肿瘤,PB-DC-VAC组与PB-DC组相比有统计学差异(P<0.05);空白组所有小鼠在二次荷瘤后第4天均长出肿瘤。实验结束后处死小鼠,取出各组小鼠瘤体称重,空白组、PB-DC组、PB-DC-VAC组、CB-DC-VAC组右侧(初次荷瘤)瘤重分别为(1.07±0.38)g、(0.86±0.26)g、(0.67±0.17)g、(0.51±0.13)g。PB-DC组、PB-DC-VAC组、CB-DC-VAC组肿瘤重量均低于空白组,CB-DC-VAC组肿瘤重量低于PB-DC组和PB-DC-VAC组,PB-DC-VAC组瘤重亦低于PB-DC组。空白组、PB-DC组、PB-DC-VAC组、CB-DC-VAC组左侧(二次荷瘤)瘤重分别为(2.56±1.36)g、(0.79±0.23)g、(0.52±0.15)g、(0.18±0.14)g。PB-DC组、PB-DC-VAC组、CB-DC-VAC组肿瘤重量显著低于空白组,差异有统计学意义(P<0.05);PB-DC组、PB-DC-VAC组肿瘤重量高于CB-DC-VAC组,差异具有统计学意义(P<0.05),但PB-DC组和PB-DC-VAC组相比,肿瘤重量差异无统计学意义。结论:1本实验建立的SCID/Beige裸鼠人结肠癌初次及二次荷瘤动物模型,为结肠癌进一步研究提供了很好实验平台。2脐带血来源的DC比外周血来源的DC具有更强的抗原提呈、促淋巴细胞增殖及诱导激活T细胞的能力。3脐带血DC疫苗比外周血DC疫苗诱导更强的肿瘤杀伤效应。4脐带血DC疫苗比外周血DC疫苗对肿瘤复发和转移具有更强预防作用。