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月季(Rosachinensis)原产于我国,是我国十大传统名花之一与世界四大切花之首,月季因其多次连续开花、花色丰富、花朵层叠以及花香迷人等特征受到人们的喜爱。本研究对月季RoCO进行了克隆,并通过转化拟南芥和月季初步明确了其功能。本研究为探索月季多次开花的分子机制奠定了基础。主要研究结果如下:1.参照已发表的月季转录组数据及同源比对结果设计CONSTANS引物,克隆获得了月月粉与绿萼的CO序列,全长为1853bp,包括两个外显子和一个内含子,cds区长度为1188bp,编码了一条含有395个氨基酸残基的多肽链,其中包括了两个BBX结构域。2.通过和拟南芥BBX家族32个基因编码蛋白序列进行聚类分析比对后,结果显示,RoCO属于BBX家族BBX1亚组,与拟南芥CONSTANS同源性最高,进一步确认了月季CONSTANS基因的可靠性。3.将月季组培苗移栽后分别进行长短日照处理,发现长日照条件(16h光照;8h黑暗)下比短日照条件(8h光照;16h黑暗)早花,极短日照(6h光照;18h黑暗)条件下不开花;并且开花表型和CO与FT的表达量呈正相关。由此认为月季开花时间对光周期敏感,开花时间响应光周期,受到光周期途径的调控。4.为了进一步验证月季CO基因的功能,构建月季35S::CO过表达载体。利用农杆菌介导花序浸染法将35S::CO过表达载体转入拟南芥野生型(gl-1)与co突变体中,得到两种不同遗传背景的拟南芥转基因植株。在长日照条件下,过表达RoCO的两种遗传背景的拟南芥开花时间都明显提前,转基因co突变体的开花时间与野生型gl-1基本一致,表明过表达35::CO回补了co突变体的晚花表型。RT-PCR结果显示,RoCO的表达与拟南芥内源AtFT的表达具有正相关性,暗示其功能与拟南芥CO类似,可以激活下游AtFT表达,从而促进拟南芥响应光周期而开花时间提前。5.利用“月季不定芽真空渗透遗传转化方法”将农杆菌35::CO浸染月季茎尖,经抗生素梯度筛选得到阳性转基因茎尖,进一步用PCR对阳性植株进行了鉴定。由于月季生长周期较长,所以还未得到转基因植株的开花表型。