鸭疫里默氏杆菌病又称鸭传染性浆膜炎，是由鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer, RA)引起的、危害养鸭业的一种细菌性传染病。目前已有4株RA的全基因组序列在GenBank上公布。RA基因组编码基因约有2000个，但其中仅有少数基因功能已知。构建大规模的随机突变库，是研究RA基因功能的一种重要手段。　　本研究以鸭疫里默氏杆菌 Yb2株为受体菌、携带有质粒 pEP4351的大肠杆菌BW19851为供体菌，通过接合转导的方法将质粒pEP4351导入Yb2株中，然后转座子Tn4351随机插入Yb2株的基因组中；再利用Tn4351上的红霉素抗性基因进行阳性接合子的筛选，构建了一个包含约3100个突变株的随机突变文库。计算得转导效率为7.1×10-6。　　通过接种雏鸭的感染实验对突变株进行了筛选，初筛共获得69株毒力减弱的突变株。利用反向PCR等技术对转座子插入位点的序列进行了测定，获得了27株突变株的转座子插入位点。使用Southern blot对转座子Tn4351插入突变株基因组的次数进行检测，以确定突变株毒力减弱是由于单一的插入突变导致的。　　在复核过的突变株中，选取了毒力减弱水平十分明显突变株Y2666，根据转座子插入失活的基因设计引物，将突变基因克隆到大肠杆菌-鸭疫里默氏杆菌穿梭表达载体pRES上，同样通过接合转导的方法将其导入突变株Y2666中，经抗性筛选和PCR鉴定得到了基因互补株cY2666。测定了野生株、突变株Y2666及互补株的生长曲线。为了验证Y2666突变基因对RA Yb2株的毒力是否有重要影响，通过动物实验测定了野生株Yb2株、突变株Y2666和互补株cY2666的半数致死量，并测定了这三株菌在接种12h、24h时血液中的细菌载量。结果显示，野生株Yb2株、随机突变株Y2666和基因互补株cY2666的生长曲线结果接近，而对雏鸭的半数致死量存在显著差异，随机突变株Y2666的LD50值比野生株Yb2升高了209倍，而互补株cY2666的LD50比突变株降低了约3倍。此外，突变株Y2666在接种雏鸭12h和24h后血液内细菌载量比野生株有显著下降。这些结果显示 Y2666突变株中的的基因插入缺失对 RA Yb2株的毒力有明显影响。　　综上所述，本研究成功构建了鸭疫里默氏杆菌的转座子随机突变库，鉴定到了部分潜在的毒力相关基因，并对其中一个基因进行了验证。本研究为进一步鉴定鸭疫里默氏杆菌的毒力相关基因奠定了基础。