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目的:依托泊苷(etoposide)作为抗肿瘤药，可以通过抑制肿瘤细胞内DNA及蛋白质合成发挥抑癌作用。有报道称:大剂量etoposide可以诱导肿瘤细胞凋亡，而小剂量etoposide则能诱导肿瘤细胞衰老。本研究拟对比不同浓度etoposide诱导人乳腺癌细胞MCF-7衰老的差异，观察细胞形态学改变及增殖情况，进行衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色，建立低浓度etoposide诱导人乳腺癌细胞MCF-7衰老模型;明确在低浓度etoposide诱导的人乳腺癌细胞MCF-7衰老过程中，Hippo通路活性的改变;解析Hippo通路活性的改变对低浓度etoposide诱导人乳腺癌细胞MCF-7衰老的影响;阐明低浓度etoposide诱导MCF-7衰老过程中，组织蛋白酶D的表达变化。 研究方法: 1.体外培养MCF-7，分别用不同浓度etoposide(0、3.125、6.25、12.5μM)处理48 h，通过观察细胞形态学改变和进行衰老相关β半乳糖苷酶染色来评估细胞的衰老程度，建立细胞衰老模型。 2.MTS法检测细胞活力、绘制细胞生存率曲线，分析etoposide对细胞增殖的影响。 3.Western blot检测Hippo通路相关蛋白、组织蛋白酶等在蛋白水平的表达变化，包括YAP、p-YAP、LATS1、p-LATS1、CTSD。 4.细胞免疫荧光染色对比etoposide处理后YAP在细胞内分布变化。 5.质粒转染抑制p-YAP的生成，明确YAP表达对肿瘤细胞衰老的影响。 结果: 1.不同浓度etoposide（0、3.125、6.25、12.5μM）诱导人乳腺癌细胞MCF-748 h，与对照组相比，普通光学显微镜下观察，etoposide处理组细胞体积明显变大、细胞数量少，而且衰老特异性SA-β-gal染色阳性的细胞数明显增加，对照组与各实验组之间的差异均有统计学意义(P＜0.05)。 2.不同浓度etoposide处理人乳腺癌细胞MCF-7后，MTS法检测发现etoposide对细胞增殖抑制作用明显，并呈剂量依赖性，各组之间的差异有统计学意义。 3.Etoposide处理MCF-7细胞后在不同作用时间点(0 min、5 min、10 min、30 min、1h、4h、24 h、48 h)收集细胞，结果发现p-LATS1呈一过性表达增高， p-YAP蛋白表达水平则呈持续性增高的状态。 4.不同浓度etoposide处理MCF-7细胞24h，细胞免疫荧光染色显示，对照组细胞YAP基本在细胞核内表达，随给药浓度的增加，YAP在细胞质内表达增加。不同浓度etoposide处理MCF-7细胞48h后，细胞免疫荧光染色显示，各实验组细胞中YAP在细胞核外表达明显增加，且表达量高于诱导24 h，对照组仍然分布于细胞核内。 5.通过质粒转染法诱导YAP持续入核，抑制YAP蛋白磷酸化，etoposide诱导后，与未转染组细胞相比，实验组YAP蛋白细胞质中表达减少。 6.Etoposide诱导MCF-7发生衰老时，组织蛋白酶D蛋白表达水平增高。 结论: 1.小剂量etoposide可以诱导人乳腺癌细胞MCF-7发生衰老; 2.Etoposide诱导MCF-7细胞衰老过程中激活了Hippo通路; 3.抑制YAP磷酸化，可以使etoposide对Hippo通路的激活作用减弱; 4.Etoposide诱导细胞衰老过程中组织蛋白酶D表达增高。