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僵蚕为蚕蛾科(Bombycidae)昆虫家蚕(Bombyx mori L.)幼虫感染白僵菌Beauveria bassiana(Bals.)Vuillant.而致死的干燥体,应用广泛,药用疗效显著。迄今为止,2015年版《中国药典》及主流药材标准《76种药材商品规格标准》中僵蚕等级仅有统货一种规格,但伴随着多样的僵蚕养殖技术及复杂的市场交易流通,导致僵蚕品质参差不齐,现行标准不能完全适用于僵蚕药材流通,且在研的僵蚕鉴定及质量控制方法操作繁琐、需要贵重设备,不利于在中药材市场中实际推广及应用。因此本文在文献沿革、市场产地调研基础上,对市售僵蚕药材各项指标数据进行整理分析,从而拟定出适用性强且方便市场流通的僵蚕药材规格等级标准,并分析探讨僵蚕内部活性成分,验证所制定标准的科学合理性。同时为了进一步扩大传统中药材的药用价值,探索了以僵蚕蛋白质酶解分离制备出高活性的ACE抑制肽的可能性,为深入研究僵蚕降血压作用提供数据基础,具体研究内容及实验结果如下:1、通过本草文献考证,亳州、荷花池、玉林、安国药材市场调查,四川省、广西省、江浙产地调查采集僵蚕样品,按药典所述“条直、粗壮”的要求测定蚕体长度、重量、直径数据并利用SPSS软件,对长度、直径与重量的数据进行非参数的K-S检验和相关性分析。结果表明所有数据均符合正态分布,长度、重量、直径99%置信区间分别为3.13~3.93cm、0.48~0.79g、0.52~0.69cm。调查中发现僵蚕丝腺环也是判断僵蚕品质的重要参数,断面状况与长度、重量及直径的数据相关,其中重量为断面状况最显著相关因素。按长度、重量及直径的30%及70%为分界线,可将僵蚕划分为一等选货、二等选货及统货三个等级。一等选货长度>3.8cm、直径>0.6cm、重量>0.7g,85%断面呈亮黑色;二等选货长度位于3.3cm~3.8cm、直径位于0.5cm~0.6cm、重量位于0.5g~0.7g,80%断面呈亮黑色;统货僵蚕长度<3.3cm、直径<0.5cm、重量<0.5g。2、研究三个等级僵蚕中草酸铵、白僵菌素、氨基酸及蛋白质等药理活性成分,验证制定出的商品规格等级标准的科学性。一等选货中草酸铵含量为4.22%,高于二等选货(4.1%)及统货(2.7%);一等选货中白僵菌素含量为571.06 mg/m L,高于二等选货(495.94 mg/m L)及统货(175.74mg/m L)。薄层层析图谱表明选货僵蚕中氨基酸总量低于统货僵蚕。其中,一等选货中含有较多赖氨酸,但苏氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸及其它极性氨基酸均少于二等选货及统货。蛋白质电泳指纹图谱分析表明一等选货中35.3KDa蛋白质含量高于二等选货及统货;统货中19.8KDa蛋白质含量高于一等及二等选货。僵蚕蛋白质经分部盐析后以蛋白质电泳指纹图谱分析,结果表明,15%-20%饱和度硫酸铵溶液处理可富集35.3KDa的蛋白质,55%-60%饱和度硫酸铵溶液处理可富集19.8KDa的蛋白质。3、研究以僵蚕蛋白质菠萝蛋白酶解产物为原料,结合单因素实验结果,酶解时间(min),酶底比([E]/[S])及初始p H,对ACE抑制率的影响均为先增大后减缓。并采用响应面法优化菠萝蛋白酶酶解僵蚕蛋白质的工艺,最佳条件为:酶解时间100min、[E]/[S]3.71%、初始p H 6.0,ACE抑制率的实际测定值为87.44%,IC50为0.32 mg/m L,模型的拟合度较高,具有实际指导意义。以0.5%TCA沉淀获得得到ACE抑制肽,并进行了初步表征,RP-HPLC分离ACE抑制肽,存在P1-P9特殊吸收峰,其中P4吸收峰对ACE有明显抑制活性,IC50值为0.12 mg/m L。综上所述,本文通过文献沿革、市场产地调查获得具体量化数据后,建立了操作性强、利于市场流通的僵蚕药材商品规格等级标准,并对该标准下划分的三个等级僵蚕进行了草酸铵、白僵菌素、氨基酸及蛋白质活性成分研究,验证了划分的僵蚕药材商品规格等级标准的科学合理性。结果表明,各等级僵蚕内在活性成分含量及种类有显著差异。同时以僵蚕蛋白质制备高活性的ACE抑制肽。上述结果为僵蚕市场流通、用药安全提供了便利,同时扩大了僵蚕药材的药用价值。