表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）在约50％以上的卵巢癌中表达水平升高，与肿瘤的增生和转移关系密切，是极具潜力的基因治疗靶点[1]。 RNA干扰（RNA interference，RNAi）是由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）介导的，序列特异的基因沉默现象。通过长度为21～23个核苷酸(nucleotide，nt)的双链小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）与细胞内相对应的mRNA结合，激活内源性RNA内切酶，特异性降解mRNA，从而抑制蛋白表达。RNA干扰技术能特异、高效、快速地抑制靶基因的表达，已广泛应用于基因治疗的研究[2-3]。 目前，应用RNAi技术抑制卵巢癌EGFR表达方面的研究尚未见文献报道。本课题通过化学合成的siRNA抑制人卵巢癌细胞株SKOV3细胞EGFR的表达，探讨其生物学特性的改变，为卵巢癌基因治疗提供一定的理论依据。 本课题共分三个部分：①RNAi技术抑制人卵巢癌细胞株EGFR表达；②干扰EGFR基因表达对SKOV3细胞增殖力的影响；③干扰EGFR基因表达对SKOV3细胞粘附、移行和侵袭行为的影响。 第一部分 RNAi技术抑制人卵巢癌细胞株EGFR表达 目的：探讨采用化学合成小干扰RNA（siRNA)介导的RNA干扰(RNAi)技术是否能有效抑制人卵巢癌细胞株SKOV3细胞EGFR表达。 方法：(1)测定SKOV3细胞株EGFR的表达。(2)体外化学合成EGFR序列特异性双链RNA（dsRNA-EGFR)，与Lipofectamine 2000结合后转染细胞，采用RT－PCR和Western blot技术检测EGFR mRNA和蛋白水平的变化，观察dsRNA-EGFR/Lipofectamine 2000对EGFR表达的抑制作用。 结果：SKOV3细胞株存在EGFR表达。dsRNA-EGFR/Lipofectamine 2000复合物转染细胞可引发EGFR序列特异性基因沉默效应，序列特异性dsRNA-EGFR对SKOV3细胞EGFR mRNA和蛋白的抑制率分别为73.65％和58.94％。与对照组比较，dsRNA-EGFR组细胞EGFR mRNA和蛋白表达水平明显下降，差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论：(1）SKOV3细胞株存在EGFR表达。(2）dsRNA-EGFR序列可特异性下调SKOV3细胞EGFR基因水平，显著降低EGFR蛋白表达。 第二部分干扰EGFR基因表达对SKOV3细胞增殖能力的影响 目的：探讨应用RNAi技术抑制EGFR基因表达对卵巢癌细胞株SKOV3增殖能力的影响。 方法：应用水溶性四唑盐(WST-1)比色法检测dsRNA-EGFR下调EGFR基因表达后SKOV3细胞增殖力的变化。 结果：dsRNA-EGFR组在转染后24h、48h和72h细胞增殖抑制率分别为22.54％、35.76％和31.07％，细胞增殖率明显下降，与对照组比较，差异具有统计学意义（P<0.01）。 结论：RNAi抑制EGFR的表达可以有效抑制卵巢癌细胞的增殖能力。 第三部分干扰EGFR基因表达对SKOV3细胞粘附、移行和侵袭行为的影响 目的：探讨应用RNAi技术抑制EGFR基因表达对卵巢癌细胞株SKOV3粘附、移动和侵袭力的影响。 方法：采用细胞粘附和移动实验检测dsRNA-EGFR下调EGFR基因表达后SKOV3细胞体外粘附和移动能力的变化，通过细胞侵袭重建基底膜实验检测SKOV3细胞体外侵袭能力的改变。 结果：dsRNA-EGFR组30min和90min时的粘附抑制率分别为12.11％和18.66％，均高于对照组细胞，差异具有统计学意义（P<0.01）；转染dsRNA-EGFR后细胞体外移动和侵袭能力的抑制率分别为25.47％和22.08％，分别与对照组比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论：RNAi抑制EGFR的表达可以有效抑制卵巢癌细胞的移动、粘附和侵袭力。