【摘 要】
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本论文以来源于Neocallimastix patriciarum木聚糖酶基因xylN为材料,对xylN进行生物信息学分析,并成功实现了其在毕赤酵母中的异源表达,通过多拷贝策略有效提高木聚糖酶表达
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本论文以来源于Neocallimastix patriciarum木聚糖酶基因xylN为材料,对xylN进行生物信息学分析,并成功实现了其在毕赤酵母中的异源表达,通过多拷贝策略有效提高木聚糖酶表达量。1.xylN共编码225个氨基酸。蛋白分子量为24.39kD,理论等电点为5.77,不存在信号肽。蛋白质二级和三级结构分析结果表明,XYLN由9.78%的a-螺旋、36.00%的延伸链、6.67%的β-转角和47.56%的无规卷曲组成。XYLN是亲水性蛋白。2.应用多拷贝毕赤酵母木聚糖酶基因策略,构建工程菌GS-pPIC9K-xylN和GS-pPIC9K-xylN-pPICZaA-xylN。由发酵罐小试试验结果可知,GS-pPIC9K-xylN-pPICZaA-xylN表达的木聚糖酶最高活性为 154023.4 U/mL,较GS-pPIC9K-xylN提高了 2.08倍。毕赤酵母重组表达的XYLN,最适pH为7.0,最适反应温度为65℃,在80℃条件下处理5 min后,剩余酶活为80.6%,该重组酶热稳定性好,具有较好的工业应用前景。
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