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目的:研究林格氏液、5%甘露醇、透明质酸钠三种不同软骨保护剂在关节切开术中对损伤软骨的保护效果。
方法:65只新西兰大白兔,随机分成实验组(60只)和对照组(5只),实验组再随机分成4个组,每组15只兔。每组再随机分成5个小组,每小组3只兔。3%水合氯醛(3mg/kg)腹腔麻醉后,1至4实验组兔双膝作髌内侧切口,暴露膝关节于实验室空气中(室温22℃,湿度65%),定量打击器造成股骨内髁软骨低能量钝性损伤。1至4组兔分成软骨暴露无保护组、软骨暴露林格氏液保护组、软骨暴露5%甘露醇保护组、软骨暴露透明质酸钠溶液保护组,各保护组手术过程中每隔10min分别用上述溶液湿润软骨,每次持续10sec,各实验组操作时间参照临床手术时间为2小时。于术后2小时对每个实验组第1小组兔处死,用手术刀片取材,取双膝股骨内侧髁全层软骨,分成3份,1份作光镜标本,1份作电镜标本,(仅实验组术后2小时、术后4周末、术后8周末及对照组),1份作蛋白多糖定量分析。每组第2至5小组兔关闭切口,术后每天肌注20万青霉素共3天预防感染。并于术后第1、2、4、8周末分别对2至5小组兔处死,取材送检同第1小组。对照组任意1只兔于分别于术后2小时、术后第1、2、4、8周末直接处死,取材送检,同第1小组。
结果:1.大体标本:对照组膝关节软骨表面有光泽、微透明、软骨表面无龟裂、无溃疡。实验组:1 组于术后2小时可见软骨失去光泽,呈灰白色;2至3组可见软骨失去部分光泽,呈粉红色;4组可见软骨和正常关节软骨一样表面有光泽、微透明,无明显改变。经8周时间恢复,1组可见软骨仍失去部分光泽,呈粉红色;2至4组可见软骨基本恢复正常,肉眼无法辨认软骨的变化。2.光镜标本:对照组:软骨基质呈粉红染、均匀、软骨细胞排列有序。实验组:1组术后2小时软骨基质淡染,且染色不均,软骨细胞排列较整齐,核固缩数目较多,弥散分布;1周末软骨细胞排列紊乱,核固缩数增多,基质染色不均;2周末逐渐加重;4周末软骨细胞排列严重紊乱,核固缩数继续增多,基质染色紊乱;8周末软骨细胞排列较前恢复,仍不整齐,核固缩数较前减少,基质染色不均。2组和3组术后2小时软骨基质淡染,且染色不均,软骨细胞排列较整齐,核固缩数目较少,散在分布;1周末软骨细胞排列紊乱,核固缩数增多,基质染色不均;4周末软骨细胞排列较整齐,核固缩数减少,基质淡染;8周末软骨细胞排列和基质染色基本正常,核固缩数偶见。4组术后2小时软骨基质淡染,且染色不均,软骨细胞排列较整齐,核固缩数目较少,散在分布;1周末软骨细胞排列紊乱,核固缩数增多,基质染色不均,程度较2、3组轻;4周末软骨细胞排列较整齐,核固缩数减少,基质淡染,恢复较2、3组快;8周末软骨细胞排列和基质染色基本正常,核固缩数偶见。3.电镜标本:对照组:扫描电镜下表面平坦,软骨膜覆盖完整,无血管分布,无纤维裸露,无渗出物。实验组:1组术后2小时软骨表面粗糙,大量渗出物,可见巨噬细胞,软骨膜脱落;8周末软骨表面仍粗糙,但较前恢复,无渗出物,巨噬细胞减少,软骨膜部分脱落,少见胶原暴露。2和3组术后2小时软骨表面粗糙,少量渗出物,巨噬细胞少见,软骨膜部分脱落,少见胶原暴露;8周末软骨表面平坦,无渗出物及巨噬细胞,软骨膜无脱落。4组术后2小时软骨表面粗糙,少量渗出物,巨噬细胞少见,软骨膜部分脱落,少见胶原暴露,程度均较2、3组轻; 8周末基本正常。4 生化学标本以对照组软骨中蛋白多糖定量测定结果为100,实验组在术后不同阶段的测定结果通过吸光度与溶液浓度的关系求得。1组术后2小时蛋白多糖含量与对照组比较变化不大,以后逐渐降低,4周末降至最低,以后逐渐恢复;8周末仍未恢复正常。2和3组术后2小时蛋白多糖含量与对照组比较变化不大,以后逐渐降低,2周末降至最低,但含量较1组高,以后逐渐恢复;8周末恢复正常。4.组术后2小时蛋白多糖含量与对照组比较变化不大,以后逐渐降低,2周末降至最低,但含量较2、3组高,以后逐渐恢复;8周末恢复正常。5.采用多因素方差分析t检验,对实验组不同时间点光镜下核固缩数及蛋白多糖含量进行统计分析。1组术后各时间点光镜下核固缩数和蛋白多糖含量与对照组相比较,有非常显著差异,P<0.01;2~4组术后2小时、术后1周、术后2周分别与对照组比较,有非常显著差异,P<0.01;2~4组术后4周、术后8周分别与对照组比较,无显著差异,P>0.05;2至4组术后不同时间点光镜下核固缩数和蛋白多糖含量与1组同期相比较,有非常显著差异,P<0.01;而2至4组间术后8周光镜下核固缩数和蛋白多糖含量无显著差异,P>0.05。结论:受到钝性损伤的关节软骨在完全暴露于空气的情况下,软骨损伤进一步加重,8周末未完全恢复;而在林格氏液、5%甘露醇、透明质酸钠三种药物定期湿润保护下,软骨损伤较轻,8周末完全恢复正常,三者之间无明显不同。