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貉细小病毒（Raccoon Dog Parvovirus,RDPV）属于细小病毒科,细小病毒属,通常会引起的一种急性,高接触性传染病,具有较高的病发率和致死率。自RDPV被发现以来,我国各地先后均有貉细小病毒性肠炎的报道,严重养危害貉业养殖的发展。目前国内RDPV的预防主要采用犬细小病毒弱毒疫苗或水貂肠炎病毒灭活疫苗,但保护率低,免疫效果一般。因此,研制特异性针对RDPV的安全,高效疫苗势在必行。为了利用大肠杆菌系统可溶性表达RDPV VP2蛋白,获得RDPV病毒样颗粒（Virus-like Particles,VLPs）。本研究首先根据大肠杆菌对密码子的偏爱性,对RDPV VP2基因序列进行优化并合成,构建重组表达质粒pET30a-VP2,转化E.coli ER2566感受态细胞。SDS-PAGE检测显示,VP2蛋白主要以包涵体形式表达;为了提高VP2蛋白可溶性表达,将重组表达质粒pET30a-VP2与分子伴侣pTf16共同转入E.coli ER2566感受态细胞进行诱导表达,通过Western-Blot鉴定RDPV VP2蛋白,并对表达条件进行优化。结果表明,RDPV VP2蛋白得到了大量表达,并且大部分以可溶性形式,最佳诱导条件为30℃,0.1 mmol/L IPTG,2 g/L L-阿拉伯糖;犬细小单克隆抗体可以特异性识别RDPV VP2蛋白。然后对纯化条件进行了优化。首先通过硫酸铵沉淀进行初级纯化,SDS-PAGE检测显示,30%硫酸铵沉淀去除了大量分子伴侣蛋白Tf16。然后分别采用分子筛层析,蔗糖密度梯度离心,疏水层析作为第二步纯化。结果显示:运用疏水层析在0.2 mol/L（NH4）2SO4的盐浓度下,大量RDPV VP2蛋白可以通过流穿穿出,其中目的蛋白的浓度可达485.5μg/mL,回收率可达90%,优于分子筛层析和蔗糖密度梯度离心。动态光散射和透射电镜分析显示:当组装液条件为50mmol/L Tris,250 mmol/L NaCl,pH 8.0时,VP2蛋白可自行组装成均一的,大小为24 nm左右的RDPV VLPs,其形态学结构与天然RDPV相似,血凝效价为216。用RDPV VLPs刺激免疫幼貉,对其体液免疫评估后发现可诱发高水平的血凝抑制抗体。在长达三个月的免疫中,当RDPV VLPs浓度≥20μg时血凝抑制抗体都保持在1︰80以上,达到了攻毒免疫保护的水平。说明本研究获得的RDPV VLPs具有良好的免疫原性。本研究通过分子伴侣与目的蛋白共表达的策略得到的VLPs具有高产量和高免疫原性的优势,这将可能成为RDPV疫苗的潜在候选者。