目的:肠道病毒71型(EV71)属微小RNA病毒科肠道病毒属A组,是引起手足口病的主要病原体之一。MicroRNA(miRNA)是一类内生的、长度约20-24个核苷酸的单链非编码小分子RNA,miRNA不编码蛋白,而是通过与mRNA的3’端非编码区或编码区的结合位点结合,降解或者抑制mRNA的翻译来抑制基因的表达。在EV71感染神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH)miRNA差异表达谱的实验基础上,利用miRNA(模拟体)mimic和miRNA(抑制体)inhibitor筛选并验证了对EV71有调控作用的miRNA-155(miR-155),并进一步阐明了miR-155通过靶向PICALM抑制EV71在神经细胞中的复制。方法:(1)收集感染EV71前后的SK-N-SH神经细胞,提取总RNA,利用miRNA芯片得出EV71感染SK-N-SH前后差异miRNA表达谱,筛选EV71感染SK-N-SH前后显著差异的miRNA;并利用实时荧光定量RT-PCR(QRT-PCR)验证芯片结果。(2)利用miRNA mimic和miRNA inhibitor转染SK-N-SH神经细胞,改变miRNA水平,利用细胞病变效应(CPE)观察、病毒滴度TCID50测定、QRT-PCR、Western blotting(WB)等方法,与阴性对照组和空白对照组比较EV71病毒复制的变化,验证mi RNA对EV71在SK-N-SH神经细胞中复制的调控作用。(3)利用miRNA的靶基因数据库mi Randa,TargetScan和miRbase,筛选miRNA的靶基因,双荧光素报告酶法验证miRNA的靶基因。利用靶基因的过表达载体和小干扰RNA(si-RNA)分别上调和下调靶基因的表达后,观察miRNA对EV71调控作用的变化,验证miRNA通过靶向基因调控EV71在神经细胞中的复制。结果:(1)在EV71感染SK-N-SH神经细胞后,mi RNA芯片和qRT-PCR结果均显示miRNA-155的表达水平显著上升,且mi R-155的上升与EV71病毒的感染量、感染时间均呈正相关。(2)mi RNA-155 mimic转染SK-N-SH神经细胞后,miR-155水平显著上升,与阴性对照相比,EV71在SK-N-SH神经细胞中的复制被抑制。同时,miR-155对EV71病毒复制的抑制作用与miR-155的表达水平呈正相关。(3)利用miRBase等生物学软件并结合基因功能,筛选出miR-155的候选靶基因PICALM。在EV71病毒感染SK-N-SH神经细胞后,PICALM基因的蛋白水平明显下降。利用PICALM的过表达载体和siRNA分别上调和下调该基因表达,结果显示,过表达PICALM基因能够减少miR-155对EV71的抑制作用,而下调PICALM基因的表达能够进一步抑制EV71的复制。结论:本研究发现miR-155通过靶向PICALM抑制EV71在SK-N-SH神经细胞中的复制。