目的 妊娠高血压综合征(妊高征)是导致孕产妇和婴儿病率及死亡率增高的主要原因。我国发生率略高于美国等发达国家，特别是东北地区受寒冷刺激的影响发生率更高，病情也更严重。关于妊高征病因和发病机理的研究一直是产科领域重要的研究方向。目前普遍接受的观点认为，胎盘源性的毒性因子引起的血管内皮细胞损伤是妊高征发病的中心环节，但损伤发生的确切机制尚不清楚。 循环中和血管内皮细胞局部存在肝细胞生长因子(HGF)和血管紧张素转化酶(ACE)，其中HGF是血管内皮细胞特异性的生长因子，促有丝分裂作用在所有内皮细胞生长因子中最强。与特异性受体c-met结合，在抗内皮细胞凋亡、增强内皮细胞屏障功能及促进内皮依赖的血管扩张等方面发挥重要作用。由ACE催化合成的血管紧张素Ⅱ对血管局部HGF的合成具有强烈的抑制作用，我们以往的研究已证实妊高征时循环中ACE活性增强，但关于妊高征时循环中HGF水平和血管内皮细胞局部HGF、ACE表达的改变目前尚未见报道。 由于临床取材的困难，对妊高征时血管内皮细胞损伤的相关研究多采用体外实验的方法，即建立妊高征血清、血浆或胎盘条件培养基与血管内皮细胞共同孵育的体外培养模型。到目前为止，对妊高征血清、血浆的内皮细胞毒性尚存在争议，但对胎盘模型的研究均得出了存在内皮细胞特异性毒性因子的结论。做为损伤因子的来源，妊高征胎盘较血清、血浆用于血管内皮细胞损伤的体外研究更具有合理性，但缺乏相关的理论依据。 胎盘模型中条件培养基的制备方法有三种，即胎盘合体滋养层细胞微绒毛膜(STBM)、胎盘绒毛培养液及胎盘可溶性提取物。其中对STBM的研究较深入，而对胎盘可溶性提取物的研究报道不多，但已有的结果显示其具有与STBM同样的内皮细胞增殖抑制活性。与STBM相比，胎盘可溶性提取物的制备具有简单、快捷、单次制备量大、制备物可直接用于细胞培养等优点，但关于该模型对妊高征血管内皮细胞损伤的研究价值尚有待于进一步的论证。 本研究的目的在于:通过对血清中HGF的检测，探讨妊高征时循环中HGF的改变及与血管内皮细胞损伤的关系;通过对血清、血浆、胎盘条件培养基影响血管内皮细胞生长状况的比较，为选择更适于妊高征血管内皮细胞损伤研究的体外培养模型提供理论依据;通过对一系列反映细胞状态指标的观察，论证胎盘可溶性提取物用于妊高征血管内皮细胞损伤体外研究的可行性;并在此基础上，通过对HGF、c一met、ACEmRNA和蛋白的检测，探讨妊高征时血管内皮细胞局部HGF系统和ACE的改变及二者的相互关系。方法 1.妊高征时循环中HGF的改变及意义 采用1:1配比的病例一对照研究。病例组10例，包括轻度妊高征患者3例，中重度妊高征患者7例。对照组10例，为年龄、孕龄、产次与病例组完全匹配的正常妊娠妇女。酶联免疫吸附法检测血清HGF水平，流式细胞仪检测循环内皮细胞(CEC)含量。结果进行配对t检验及直线相关分析。 2.妊高征血管内皮细胞损伤体外培养模型的研究 采用1:1配比的病例一对照研究。病例组10例，包括轻度、中度妊高征患者各3例，重度妊高征患者4例。对照组10例，为年龄、孕龄、产次与病例组完全匹配的正常妊娠妇女。制备相同蛋白浓度(sm酬nil)的血清、血浆、胎盘可溶性提取物条件培养基，建立与血管内皮细胞株ECV一304共同孵育的体外培养模型。MTr法比较各模型中血管内皮细胞增值率的改变。光电镜、台盼蓝排除试验、贴壁率试验、3H一TdR、’H一玩u掺人试验观察胎盘可溶性提取物条件培养基对血管内皮细胞形态、活力和增殖能力的影响。各试验均设篡孔，取中位数做为各标本检测结果，进行配对‘检验或单因素方差分析。 3.妊高征时血管内皮细胞局部HGF系统和ACE的改变及二者相互关系的探讨 制备含不同浓度(loom岁L，100Om扩L)血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)的胎盘可溶性提取物条件培养基(smg/血)，建立与ECV一304共同孵育的体外培养模型。通过反转录聚合酶链式反应和免疫印迹的方法，检测血管内皮细胞局部HGF、c一met、ACEmRNA和蛋白的表达。结果进行单因素方差分析。结果 1.妊高征时循环中HGF的改变及意义 (l)与正常妊娠组相比，轻度妊高征组血清HGF上升，中重度妊高征组下降。 (2)与正常妊娠组相比，轻度妊高征组外周血CEC含量增加，中重度妊高征组更多。 (3)正常妊娠妇女和妊高征患者血清HGF水平和外周血CEC含量呈明显的负相关。 2.妊高征血管内皮细胞损伤体外培养模型的研究 (1)血清、血浆条件培养基促进ECV一304增殖，作用于48h达高峰;妊高征组血清增值率低于正常妊娠组。 (2)胎盘可溶性提取物条件培养基抑制ECV一304增殖，作用于96h内保持基本稳定;妊高征组胎盘抑制率高于正常妊娠组。 (3)胎盘可溶性提取物条件培养基可引起ECV一304形态的改变，包括膜发泡、线粒体增大变形、核染色质凝集、凋亡小体形成等。 (4)胎盘可溶性提取物条件培养基可引起ECV一304的凋亡，其中正常妊娠组早期凋亡细胞百分比增加