【摘 要】
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以广谱宿主范围柯斯质粒pLAFR3为载体在大肠杆菌菌株DH5α中构建了慢生型大豆根瘤菌菌株GX201的一个基因文库.根据已报道的慢生型大豆根瘤菌菌株JH的脯氨酸脱氢酶基因序列的
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以广谱宿主范围柯斯质粒pLAFR3为载体在大肠杆菌菌株DH5α中构建了慢生型大豆根瘤菌菌株GX201的一个基因文库.根据已报道的慢生型大豆根瘤菌菌株JH的脯氨酸脱氢酶基因序列的高度保守区域设计了一对寡核苷酸引物,应用该对引物通过PCR从慢生型大豆根瘤菌GX201基因组DNA中扩增出一个PCR产物,DNA测序表明该产物为443bp,它和慢生型大豆根瘤菌JH的脯氨酸脱酶基因具有93.54%的同源性.以该PCR产物为探针和慢生型大豆根瘤菌GX201基因文库作菌落原位杂交,一共得到5个可能的阳性克隆.再以该PCR产物和这些阳性克隆的经EcoRI酶切片的质粒DAN Southern杂交,结果只有一个克隆的约2.5kb EcoRI片为示杂交,该得组质粒被命名为PGXN300,其上含有约16kb的插入片段,确定了BamHI EcoRI和PstI在该DNA顺序上的酶切位点,杂交的2.5kb EcoRI片段位于插入片段的中间位置.通过三亲本接合将pGXN300导入到快生型大豆根瘤菌HN01中而获得工程菌GX300.植株水培法结瘤试验表明GX300比出发菌株NH01在大豆柳江1号上的结瘤数显著提高,但根瘤的重量和植株干重与出发菌株相并没有差异.
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