研究背景众所周知,增生性瘢痕是一直困扰医生和患者的问题,尤其是让整形外科医生和皮肤外科医生面临着重大挑战。增生性瘢痕(HS)主要是由纤维细胞过度增殖和胶原过量堆积以及慢性炎症导致的毛细血管过度生长所致。手术、烧伤、意外伤等创伤后都可能形成HS,感染、异物等也是其形成的诱发因素,全球每年有数百万人饱受其害。在治疗方面,大部分研究倾向于如何用药物预防HS的形成,这并不能反映其治疗作用。对瘢痕的治疗始于1835年,主要是用压力疗法,逐渐发展到硅酮凝胶膜、局部皮质类固醇激素注射、维甲酸、外科切除移植、冷冻、放射、5-FU、IFN等治疗手段以及多种方法联合治疗,联合治疗的效果要优于单用一种治疗方法的效果,但其中仍然存在疼痛、皮肤萎缩、色素改变、复发率高等副作用。为了让患者达到更满意的治疗效果,国内外学者学者在25年前寻找到了新的治疗方法：激光。CO2激光被最早应用于治疗增生性瘢痕,但复发率高于90%,且有红斑、渗出、不适等副作用,所以现在临床上已基本被其他方法所替代。国外也有个别应用强脉冲激光(IPL)治疗增生性瘢痕的报道,其治疗的有效性未得到证实。脉冲染料激光(PDL),被认为是最有效的激光治疗方法,但个别报道在随机对照研究中,有红斑等副作用产生,且有效性只在中低等(低0-33%改善,中34-66%改善),但是其治疗效果可能与激光波长有关。2940nm点阵铒激光治疗增生性瘢痕见有一篇报道,但其治疗机制不明。经过许多研究者不断的探索与实践,认为激光联合其他治疗方法可能是最佳的选择,但是增生性瘢痕的形成机制复杂,激光对其治疗作用的具体机制也尚不明确。研究认为激光治疗增生性瘢痕的主要原理是利用激光的烧灼、汽化、切割、凝固及散焦等技术祛除瘢痕组织或损伤瘢痕内血管、抑制胶原合成、抑制成纤维细胞的增殖及诱导细胞凋亡。点阵激光作用于瘢痕时产生矩阵状排列的微热损伤,会刺激皮肤重新均匀地启动修复程序,最终使包括表皮和真皮在内的全层皮肤发生重塑和重建,达到治疗目的。为了更好的了解增生性瘢痕的形成机制及找到更好的治疗方法,研究者进行了许多基础性研究,由于基础性研究需要大量的标本,所以现在一般采取制作动物模型的方法进行研究。目前,人们主要建立了3种动物模型：裸鼠模型、兔耳模型和雌性杜洛克猪模型。由于裸鼠模型是将人的HS组织移植到裸鼠身上,其缺点就有不是自身产生的HS、不能动态观察HS的形成,为了克服这些缺点,研究者利用大白兔,在其耳朵腹侧面造成缺损创面,并使其自然愈合形成增生性瘢痕,从组织学等方面观察,兔耳创面可以产生与人HS类似的增生块,因此这种方法被广泛应用于增生性瘢痕的基础性研究。基于此,本实验旨在应用兔耳增生性瘢痕模型对2940nm点阵铒激光在增生性瘢痕中的影响进行研究,进一步探讨其作用机制。研究目的1、观察2940nm点阵铒激光是否对兔耳增生性瘢痕有治疗作用。2、进一步研究2940nm点阵铒激光对增生性瘢痕内VEGF的影响,探讨其可能的作用机制。研究方法1.兔耳增生性瘢痕模型的建立及分组：取37只新西兰大耳白兔,实验前用剃胡刀将兔耳腹侧面毛发去除,以2ml：0.1g盐酸氯胺酮注射液(30mg/kg)耳缘静脉麻醉后,兔耳腹侧面皮肤乙醇消毒。避开可见血管,用9mm环钻钻出5个圆形皮损,皮损区内皮肤连同其下软骨膜一起去除,保留软骨。术后用红霉素眼膏涂于皮损处预防感染并观察伤口愈合情况及瘢痕形成时间,待兔耳瘢痕模型形成后,共有370个瘢痕,每只兔耳5个瘢痕面随机给予不同处理方式：选19只兔子的170个瘢痕作为阴性对照组(瘢痕面未做治疗且瘢痕自然生长),另18只兔子的160个瘢痕作为激光治疗组(2940nm点阵铒激光治疗,治疗参数：密度3-5%,剥脱深度300-800μm)。2.形态学观察：取24只新西兰白兔,激光治疗组和对照组各12只。在给予瘢痕面不同处理方式之后的第7、14、30天大体观察兔耳瘢痕增生情况,同时用游标卡尺,测量治疗前、治疗后第7、14、30天4个时间点瘢痕的厚度及瘢痕周围正常皮肤的厚度,以瘢痕的厚度/正常皮肤的厚度表示瘢痕的增生指数(SEI),其测量方法见图一。按以上方法测出每个时间点的SEI,并算出每个时间点瘢痕增生指数的均数,以x±s表示,结果做配对t检验。3.组织学观察：激光组在给予瘢痕面激光治疗后第7、14、30天各取12个瘢痕组织块,对照组在以上相同时间点及瘢痕自然生长后70天各取12个瘢痕组织块,标本经10%甲醛溶液固定24h后乙醇脱水、石蜡包埋、切片,HE染色观察,采用leika图像分析仪,在光镜10×40倍视野下,测出瘢痕内血管面密度(血管总面积/视野内瘢痕总面积)和数密度(血管数量/视野内瘢痕总面积)；采用SP免疫组化法检测标本中VEGF的表达。阴性对照以PH7.4的PBS代替第一抗体作为质控标准。结果1.肉眼观察,激光组在治疗后比治疗前瘢痕厚度明显变薄。激光治疗组治疗后第7、14、30天,瘢痕增生指数逐渐减小,与对照组相比明显下降。2.HE染色观察,瘢痕组织内血管由粗大变细小,胶原纤维由排列不齐变排列整齐。3.免疫组化染色观察,激光治疗组VEGF水平逐渐降低。结论1、在动物实验中,2940nm点阵铒激光对增生性瘢痕具有一定有效性,为临床治疗增生性瘢痕提供新思路和依据。2、本研究2940nm点阵铒激光作用于兔耳腹侧增生性瘢痕后,通过对瘢痕大体观察、HE染色观察及免疫组化观察瘢痕内VEGF的表达,2940nm点阵铒激光作用兔耳增生性瘢痕可破坏瘢痕内血管,进而减少胶原产生,使瘢痕变小,需进一步探讨其更深作用机制。