论文部分内容阅读
细菌表面展示技术作为噬菌体表面展示技术的有益补充，已被广泛用于生命科学各个领域。而构建基因工程减毒活疫苗是研究细菌展示系统的最初动因，也是这一系统最活跃的研究方向。但以往研究多是将已知抗原片段或表位展示于细菌表面用作实验性活菌苗。本研究提出了从细菌展示随机肽库筛选获得的抗原表位直接用作应急疫苗的新思路。 本研究首先以针对HBV pres的单克隆抗体为模型，生物淘洗商品化细菌鞭毛展示随机十二肽库，获得该抗体抗原模拟表位，核心序列为R-RG-Y，与HBV preS蛋白的135-140氨基酸同源；将展示模拟表位的菌体克隆直接免疫小鼠，可获得针对HBV preS蛋白的高滴度、高特异性抗体，表明从细菌展示随机肽库中筛选获得的抗原表位直接用于应急疫苗研制是可行的。 为克服常规生物淘洗在多抗表位筛选中的不足，以HBV preS单抗为靶分子利用FACS对模拟文库以及随机肽库FliTrxTM进行筛选，在此基础上建立消减FACS分选HBV preS免疫血清多克隆抗体抗原表位的方法，为今后从病人血清样品中进行抗原表位的筛选奠定了基础。 为更好地获得不同形式抗体的抗原表位，以细菌IgA蛋白酶β结构域为骨架构建一个库容量为5×106的线性化随机肽库，经分析库容量与多样性均符合抗原表位筛选要求。该随机肽库是对现有细菌展示系统的有益补充。 总之，本研究以针对HBV-preS蛋白的单克隆抗体和多克隆抗体为模型，建立从细菌表面展示随机肽库中快速获得抗原表位技术，并探讨这些携带模拟表位的细菌克隆直接应用作实验性活菌苗的可行性，探索一条将筛选到的抗原表位直接用于疫苗研制的技术路线，为在发生突发性的或未知类型的生物袭击时，研制应急防护疫苗进行了有益尝试。