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猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus，PDCoV)感染能导致猪群发生急性腹泻、呕吐、精神不振、脱水消瘦等典型性临床症状，可感染所有日龄的猪，但主要以一周龄仔猪为主。PDCoV的临床症状与猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染猪只的临床症状极为相似，且混合感染现象甚是普遍。目前对PDCoV在猪场中的流行情况、致病机理等尚不清楚，阻碍了PDCoV疫苗及有效药物的研发。
本研究对河南省部分地区猪场的PDCoV感染情况进行了调查，了解其流行现状，并对典型的临床病例进行研究，分析自然感染PDCoV后仔猪的临床症状、剖检病理变化，病毒在体内组织的分布情况以及组织病理学观察。并用本实验室成功分离、保存的PDCoV CH-01毒株对仔猪进行人工感染试验，并对感染猪的临床症状、剖检变化、排毒情况、病毒在体内的组织分布及组织病理变化等进行研究。具体内容如下:
1.河南省部分地区PDCoV的流行病学调查
本研究自2017年3月至2018年12月在河南省开封、鹤壁、洛阳、信阳、驻马店、濮阳、济源、周口、焦作、漯河、南阳、平顶山、商丘、新乡、安阳共15个地区的猪场采集266份腹泻样品，用PDCoV特异性引物进行RT-PCR检测，并对检测出的阳性病料中的PDCoV进行序列测定。结果显示:266份样品中有112份样品为PDCoV阳性，阳性率为42.1％。在河南省大部分地区的猪场都检测到PDCoV阳性，其中在商丘、周口、新乡、安阳地区的猪场样品中PDCoV阳性率较高，达到60％以上，在洛阳、开封的猪场病料样品中未检出PDCoV阳性。在时间上全年均有感染，其中在天气较冷的月份（1、2、3和12月）该病毒阳性率较高，此外在天气较热的月份（6、7、9月）也有同样有PDCoV阳性。同时对来自于不同饲养阶段的病料进行检测，其中30日龄以下的仔猪阳性率为49.6％(63/127)，30-150日龄的保育及育肥猪阳性率为40.9％(27/66)，甚至在150日龄以上的种猪及母猪的阳性率为30.1％(22/73)。流行病学调查结果显示PDCoV在河南省大部分地区的猪场流行，全年病料均有PDCoV感染情况，其中天气较冷的季节阳性率高于天气热的季节，虽然在所有生长阶段的猪只均有感染，但30日龄以下的仔猪PDCoV的阳性率更高。本试验对PDCoV在河南地区猪场的流行情况进行闸述，为今后对该病的防控提供指导。
2.临床上自然感染PDCoV的仔猪发病特征分析
为了解临床上自然感染PDCoV的仔猪发病特征，我们对临床单独感染PDCoV的病例在临床症状、解剖学病变、病毒在体内组织嗜性和组织学病理变化等方面进行研究。用PCR方法对临床病例中感染PDCoV的仔猪进行猪常见病毒的检测，确定单独感染PDCoV病例。并对其临床症状及剖检病变观察分析;利用TaqMan荧光定量方法对单独感染PDCoV的仔猪进行病毒体内组织分布检测;同时对肠道组纵进行H.E染色及免疫组化分析。研究表明:单独感染PDCoV的7日龄仔猪在临床上腹泻初期为黄色稀粪而的后有水样腹泻，背毛脏乱，精神状态差，腹泻2-3天后发生死亡，且病死率极高，有的出现整窝死亡情况;剖检可见病变主要集中在消化道:胃内有未消化的乳凝块，小肠壁、肠系膜可见点状和弥漫性出血，肠壁变薄、透明，肠腔内充盈着黄色的液体，在空肠、盲肠、结肠胀气，此外部分小肠肠段有皱缩等特征性病变。PDCoV在体内组织分布试验发现在心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、腹股沟淋巴结及血清中均能检测到PDCoV，表明PDCoV自然感染后有广泛的组织嗜性;组织病理学试验发现在空肠和回肠有肠绒毛脱落、急性肠炎等病理变化;免疫组织化学结果显示在空肠和回肠的基底层和胞浆中看到大量的PDCoV分布。试验结果表明PDCoV单独感染能够导致仔猪发生腹泻、呕吐、消瘦等典型的临床症状，并对其组织分布及组织病理学进行分析，发现空肠、回肠有肠绒毛脱落，炎性细胞增多，抗原表位集中在空肠、回肠的基底层及肠细胞胞浆中。本研究通过对临床上自然感染PDCoV的仔猪发病特征分析，为进一步了解PDCoV的致病机理奠定理论基础。
3.人工感染PDCoV对仔猪的致病性分析
为了研究PDCoV流行毒株感染仔猪的致病性情况，了解其与PDCoV自然感染的差异，用本实验室分离鉴定的PDCoV CH-01毒株（病毒滴度为7.5TCID50/0.1ml），经口灌服4头5日龄仔猪。对其临床症状进行观察，用TaqMan荧光定量方法对感染后1、2、3、4天的直肠拭子进行检测，了解感染后仔猪的排毒情况，并检测感染后病毒在机体内的组织嗜性，及组织病理学变化。结果显示:在攻毒后30h(hpi)，仔猪首先发生呕吐的临床症状，并在36hpi开始发生轻微腹泻，48hpi出现明星的水样腹泻，并迅速开始出现消瘦等症状。1dpi时在粪便中检测列PDCoV，并且在3dpi粪便中病毒量达到高峰为107.74copies/mL，此时仔猪临床症状也最为明显。同时发现在肝、脾、肾、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、腹股沟淋巴结、血清中均检测到病毒RNA，说明人工感染后，病毒在体内有广泛的组织嗜性。组织病理学分析发现仔猪十二指肠、空肠、回肠和肺脏发现明显的病理变化，肠道的病理变化主要有水肿、肠绒毛脱落、肠腺脱离基底膜等病理变化，在回肠中发现大量的杯状细胞和淋巴细胞，提示急性肠炎病症，而在肺脏上，发现肺泡扩张的病理变化。本研究通过PDCoV人工感染仔猪试验，以期能为PDCoV的致病机制的研究及疫苗和有效药物的研发提供前期研究基础。
本研究对河南省部分地区猪场的PDCoV感染情况进行了调查，了解其流行现状，并对典型的临床病例进行研究，分析自然感染PDCoV后仔猪的临床症状、剖检病理变化，病毒在体内组织的分布情况以及组织病理学观察。并用本实验室成功分离、保存的PDCoV CH-01毒株对仔猪进行人工感染试验，并对感染猪的临床症状、剖检变化、排毒情况、病毒在体内的组织分布及组织病理变化等进行研究。具体内容如下:
1.河南省部分地区PDCoV的流行病学调查
本研究自2017年3月至2018年12月在河南省开封、鹤壁、洛阳、信阳、驻马店、濮阳、济源、周口、焦作、漯河、南阳、平顶山、商丘、新乡、安阳共15个地区的猪场采集266份腹泻样品，用PDCoV特异性引物进行RT-PCR检测，并对检测出的阳性病料中的PDCoV进行序列测定。结果显示:266份样品中有112份样品为PDCoV阳性，阳性率为42.1％。在河南省大部分地区的猪场都检测到PDCoV阳性，其中在商丘、周口、新乡、安阳地区的猪场样品中PDCoV阳性率较高，达到60％以上，在洛阳、开封的猪场病料样品中未检出PDCoV阳性。在时间上全年均有感染，其中在天气较冷的月份（1、2、3和12月）该病毒阳性率较高，此外在天气较热的月份（6、7、9月）也有同样有PDCoV阳性。同时对来自于不同饲养阶段的病料进行检测，其中30日龄以下的仔猪阳性率为49.6％(63/127)，30-150日龄的保育及育肥猪阳性率为40.9％(27/66)，甚至在150日龄以上的种猪及母猪的阳性率为30.1％(22/73)。流行病学调查结果显示PDCoV在河南省大部分地区的猪场流行，全年病料均有PDCoV感染情况，其中天气较冷的季节阳性率高于天气热的季节，虽然在所有生长阶段的猪只均有感染，但30日龄以下的仔猪PDCoV的阳性率更高。本试验对PDCoV在河南地区猪场的流行情况进行闸述，为今后对该病的防控提供指导。
2.临床上自然感染PDCoV的仔猪发病特征分析
为了解临床上自然感染PDCoV的仔猪发病特征，我们对临床单独感染PDCoV的病例在临床症状、解剖学病变、病毒在体内组织嗜性和组织学病理变化等方面进行研究。用PCR方法对临床病例中感染PDCoV的仔猪进行猪常见病毒的检测，确定单独感染PDCoV病例。并对其临床症状及剖检病变观察分析;利用TaqMan荧光定量方法对单独感染PDCoV的仔猪进行病毒体内组织分布检测;同时对肠道组纵进行H.E染色及免疫组化分析。研究表明:单独感染PDCoV的7日龄仔猪在临床上腹泻初期为黄色稀粪而的后有水样腹泻，背毛脏乱，精神状态差，腹泻2-3天后发生死亡，且病死率极高，有的出现整窝死亡情况;剖检可见病变主要集中在消化道:胃内有未消化的乳凝块，小肠壁、肠系膜可见点状和弥漫性出血，肠壁变薄、透明，肠腔内充盈着黄色的液体，在空肠、盲肠、结肠胀气，此外部分小肠肠段有皱缩等特征性病变。PDCoV在体内组织分布试验发现在心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、腹股沟淋巴结及血清中均能检测到PDCoV，表明PDCoV自然感染后有广泛的组织嗜性;组织病理学试验发现在空肠和回肠有肠绒毛脱落、急性肠炎等病理变化;免疫组织化学结果显示在空肠和回肠的基底层和胞浆中看到大量的PDCoV分布。试验结果表明PDCoV单独感染能够导致仔猪发生腹泻、呕吐、消瘦等典型的临床症状，并对其组织分布及组织病理学进行分析，发现空肠、回肠有肠绒毛脱落，炎性细胞增多，抗原表位集中在空肠、回肠的基底层及肠细胞胞浆中。本研究通过对临床上自然感染PDCoV的仔猪发病特征分析，为进一步了解PDCoV的致病机理奠定理论基础。
3.人工感染PDCoV对仔猪的致病性分析
为了研究PDCoV流行毒株感染仔猪的致病性情况，了解其与PDCoV自然感染的差异，用本实验室分离鉴定的PDCoV CH-01毒株（病毒滴度为7.5TCID50/0.1ml），经口灌服4头5日龄仔猪。对其临床症状进行观察，用TaqMan荧光定量方法对感染后1、2、3、4天的直肠拭子进行检测，了解感染后仔猪的排毒情况，并检测感染后病毒在机体内的组织嗜性，及组织病理学变化。结果显示:在攻毒后30h(hpi)，仔猪首先发生呕吐的临床症状，并在36hpi开始发生轻微腹泻，48hpi出现明星的水样腹泻，并迅速开始出现消瘦等症状。1dpi时在粪便中检测列PDCoV，并且在3dpi粪便中病毒量达到高峰为107.74copies/mL，此时仔猪临床症状也最为明显。同时发现在肝、脾、肾、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、腹股沟淋巴结、血清中均检测到病毒RNA，说明人工感染后，病毒在体内有广泛的组织嗜性。组织病理学分析发现仔猪十二指肠、空肠、回肠和肺脏发现明显的病理变化，肠道的病理变化主要有水肿、肠绒毛脱落、肠腺脱离基底膜等病理变化，在回肠中发现大量的杯状细胞和淋巴细胞，提示急性肠炎病症，而在肺脏上，发现肺泡扩张的病理变化。本研究通过PDCoV人工感染仔猪试验，以期能为PDCoV的致病机制的研究及疫苗和有效药物的研发提供前期研究基础。