东北红豆杉中10-DAB Ⅲ的提取纯化及多西紫杉醇的半合成

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本文以东北红豆杉枝叶为原料,对多西紫杉醇的前体化合物——10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ(简称10-DABⅢ)的提取纯化工艺进行了研究,并以10-DABⅢ为原料与合成的侧链前体进行了酯化缩合,合成了抗癌药物多西紫杉醇。并得出以下结论:1确立了用于10-DABⅢ定性和定量检测的HPLC条件:色谱柱Curosil-PFP 5μ(4.6 mm×250 mm),检测波长232.1 nm,流速1 mL/min,进样量10μL,流动相为1-25 min乙腈-水(25/75),25-60 min乙腈-水(37/63)体系。结果表明,在此色谱条件下进行10-DABⅢ的检测,精密度高,重现性好,准确度高,适用于红豆杉及其他制剂中10-DABⅢ的质量分析检验。2确立了东北红豆杉枝叶中10-DABⅢ的最佳提取工艺参数:提取方法为超声提取;提取溶剂为80%;提取固液比为1:15;提取时间为30 min;提取次数为3次。在此提取工艺下,10-DABⅢ提取率为0.052%。3确立了东北红豆杉枝叶中10-DABⅢ的最佳纯化工艺流程:首先对东北红豆杉枝叶粗提物进行醇提水沉(比例为1:3),将紫杉醇和三尖杉宁碱等弱极性物质沉淀除去,将10-DABⅢ留在水相中,用氯仿萃取含有10-DABⅢ的水相(萃取比例为2:1,萃取次数为3次),将水相中的10-DABⅢ转移到有机相中,进行硅胶柱层析,以乙酸乙酯:石油醚=3:2(V/V)为洗脱剂,收集硅胶柱层析富含10-DABⅢ的馏分,可以得到含量为63%10-DABⅢ的粗品,收率为86.74%。再通过乙腈结晶、乙酸乙酯/石油醚重结晶的方法,可以得到纯度为90%的10-DABⅢ白色粉末。整个纯化过程10-DABⅢ的收率为59%。4以纯化后的10-DABⅢ为原料,合成了多西紫杉醇,在参考文献基础上对合成路线进行了部分改进。首先,合成其侧链前体,以α-甲基苯甲胺和苯甲醛为初始原料合成亚胺,以羟基乙酸和乙酰氯为初始原料合成烯酮,再将亚胺与烯酮进行四元环合反应,合成β-内酰胺。将β-内酰胺进行脱乙酰和酸催化开环反应得到具有两个手性中心的开环产物,开环产物在钯炭的催化作用下氢化脱苄,然后利用Boc试剂对活泼氨基进行保护,再利用4-甲氧基苯甲醛二甲缩醛对缩合氨基与羟基形成噁唑烷,最后进行水解后得到最终的多西紫杉醇侧链前体(4S,5R)-N-叔丁氧羰基-2-(4’-甲氧基)苯基-4-苯基-1,3-氧氮杂戊环-5-甲酸,纯度为98%,收率为22.6%。其次,利用三氯乙氧基乙酰氯对10-DABⅢ的7位和10位羟基进行保护,然后在DIC缩合剂与DMAP催化剂的存在下与侧链进行酯化反应。在经过PTSA和Zn-AcOH两步脱保护反应后,得到最终目标物多西紫杉醇,纯度为97%,3步反应总收率为62%。
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