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阿尔茨海默病(AD)是以认知功能障碍及记忆减退或缺失为主要特征的神经退行性疾病。发病机制复杂,目前β-淀粉样蛋白(Aβ)作为AD发病始动因子已得到公认。神经细胞外老年斑(SP)形成是AD最具特征的病理改变,在SP周围有大量活化的小胶质细胞(MG)和炎性因子存在,国内、外研究认为MG在AD发生过程中起“双刃剑”的作用,但其具体机制以及“双刃剑”作用与Aβ剂量有无关系并不清楚。目的:探讨MG在Aβ所引起AD中的作用、机制及与Aβ剂量的关系,分析不同Aβ剂量下,MG被激活后清除、吞噬Aβ能力,分析清道夫受体A(SRA)、Toll样受体2(TLR-2)、核因子-κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)表达与Aβ剂量、神经元损伤的关系,以及指标间的相互作用,为寻找治疗阿尔茨海默病新的靶点提供实验依据。方法:取成年雄性Wistar大鼠50只,随机分为A、B、C、D、E五组,每组10只。采用脑立体定位技术定位海马CA1区,A组大鼠双侧海马CA1区注射5μl生理盐水,B、C、D、E组注射5μl Aβ(分别含Aβ25-35 0.5、1、5、10μg),于注射Aβ7d后行Morris水迷宫实验,记录大鼠60s内寻找平台的潜伏期;水迷宫实验6d后撤去平台,记录大鼠2min在平台区域象限内穿越次数、停留的时间以及所游路程与总路程比值。于注射Aβ14d后处死,取血,ELISA法检测TNF-α、IL-1β含量。每组取6只大鼠,迅速取新鲜脑海马,实时荧光定量PCR技术检测CD11b、MMP-9、TIMP-1、TLR-2、NF-κB基因的mRNA表达;每组取4只大鼠行多聚甲醛灌注,制作标本,HE染观察细胞形态、数量变化和免疫组化(IHC)检测海马CA1区Aβ、CD11b、SRA、TLR-2表达。结果:1水迷宫实验结果大鼠海马注射Aβ后的第10、11、12、13d,随着时间推移,大鼠寻找平台潜伏期逐渐缩短,而各时间点D、E两组大鼠寻找平台的潜伏期明显长于a、b、c三组(p<0.01),且d、e两组间也有差别(p<0.01);注射aβ13d后,d(7.78±1.33)、e(5.32±1.25)组大鼠2min内穿越平台区域的次数明显少于a(13.64±1.85)、b(12.97±1.58)、c(12.48±1.61)三组(p<0.01);在平台象限停留的时间d(44.28±2.96s)、e(41.32±3.12s)组明显短于a(59.25±2.20s)、b(57.38±3.66s)、c(57.27±3.05s)三组(p<0.01);在平台象限所游路程与总路程比d(44.68±2.61%)、e(41.52±2.72%)两组明显小于a(62.21±1.82%)、b(61.50±2.56%)、c(60.45±2.48%)三组(p<0.01)。2aβ对大鼠海马神经元的影响(he)光镜下a、b、c三组的大鼠海马ca1区有3~4层细胞,排列整齐,细胞形态清晰、完整,核染色深,可见神经元的突起;d、e两组的大鼠海马ca1区大段神经元缺失,细胞层数为1~2层,神经元缺失部分有大量mg浸润。d(84.75)、e(66.63)组大鼠海马ca1区神经细胞数明显少于a(126.25)、b(120.63)、c(114.75)三组(p<0.01),d、e两组间差别也有统计学意义(p<0.05)。3ihc检测结果aβ主要分布在神经细胞外和mg胞浆中,d(0.0202±0.0057)、e(0.0257±0.0074)两组aβ阳性表达率均高于a(0.0022±0.0004)、b(0.0041±0.0010)、c(0.0061±0.0016)三组(p<0.01),且d、e两组间差别也有统计学意义(p<0.05);mg分布部位与aβ沉积部位相似,d(0.0460±0.0083)、e(0.0615±0.0078)两组cdllb阳性表达率明显高于a(0.0166±0.0048)、b(0.0216±0.0034)、c(0.0236±0.0044)三组(p<0.01);sra在mg上高表达,d组(0.0430±0.0113)、e组(0.0609±0.0175)sra阳性表达明显高于a(0.0109±0.0036)、b(0.0212±0.0098)、c(0.0264±0.0091)三组(p<0.01);tlr-2主要聚集在aβ斑块周围,d组(0.0366±0.0073)、e组(0.0448±0.0108)tlr-2阳性表达明显高于a(0.0187±0.0058)、b(0.0100±0.0034)、c(0.0151±0.0060)三组(p<0.01),且a、c两组间及d、e两组间比较差异均有统计学意义(p<0.05)。4elisa检测结果血清tnf-α检测结果显示,d(568.65±44.66)、e(685.06±29.92)组明显高于a(426.866±55.91)、b(432.99±28.09)、c(488.14±39.04)三组(p<0.01),且a、c两组间及d、e两组间比较差异均有统计学意义(p<0.05);血清il-1β含量检测显示,d(104.60±9.32)、e(143.38±17.09)组明显高于a(49.13±8.46)、b(60.89±14.71)、c(79.81±9.94)三组(P<0.01),且C组与A组差异有统计学意义(P<0.01),D、E两组间比较差异也有统计学意义(P<0.05)。5 qRT-PCR检测结果大鼠海马组织内CD11b基因的mRNA表达D(1.9052±0.2580)、E(2.3619±0.4195)两组明显高于A(1.0000±0.0000)、B(1.1803±0.0606)、C(1.2795±0.1821)组(P<0.01);MMP-9基因的mRNA表达D(4.2696±1.4891)、E(7.8016±1.2583)组明显高于A(1.0000±0.0000)、B(1.4696±0.3082)、C(1.8371±0.4122)组(P<0.01);TIMP-1基因的mRNA表达D(3.4530±0.8926)、E(5.5269±1.3717)组明显高于A(1.0000±0.0000)、B(1.1314±0.1143)、C(1.3905±0.1419)组(P<0.01);TLR-2基因的mRNA表达D(2.1859±0.3814)、E(2.9777±0.3907)组明显高于A(1.0000±0.0000)、B(1.1785±0.1066)、C(1.4633±0.1273)组(P<0.01);NF-κB基因的mRNA表达D(1.7470±0.1256)、E(2.2719±0.5332)组明显高于A(1.0000±0.0000)、B(1.2743±0.1651)、C(1.4291±0.0777)组(P<0.01);且D、E组间各基因的mRNA表达水平均有显著差异(P<0.01),另TLR-2、NF-κB基因的mRNA表达C组与A组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1 Aβ可激活MG,活化的MG可吞噬、清除Aβ。2小剂量Aβ激活MG表面的SRA、TLR-2,促进MG对Aβ的吞噬和清除;大剂量Aβ时,同时激活NF-κB,促进炎症因子释放,导致神经元损伤。