目的：L丝裂霉素C(删C)与大鼠肝脏细胞色素P450的相互作用 2．丝裂霉素C对肝原代细胞的毒性作用及与细胞色素P450的相关性： 在不同条件(有氧、乏氧、Y射线照射和细胞P450同工酶活性变化)，以及不同作用时间下，研究MMC对兔、人肝原代细胞毒性的变化，探索MMC细胞毒性作用的影响因素，及其作用机制。 方法：L丝裂霉素C(删C)与大鼠肝脏细胞色素P450的相互作用 (DINVIVO研究3GyY射线照射和MMC对雄性SD大鼠肝脏细胞色素P450含量、CYP281和CYP2E1活性的影响： 分别给大鼠腹腔注射lmg／Kgd的MMC(分1d，连续3d及6d用药三组)，3mg／Kg的MMC1d，3Gyγ射线全身照射，3GyY射线全身照射加1d3mg／KgMMC，另设无MMC的空白对照和溶剂对照。各组处理结束后24h，处死大鼠取肝脏，制备微粒体，测P450含量、CYP281、CYP2E1活性。 (2)麟VIVO研究3种诱导剂对雄性sD大鼠细胞色素P450含量、CYP281活性的影响，以及SKF525A对不同活性CYP281的抑制作用： 连续3d给大鼠腹腔注射各种诱导剂[地塞米松(Dexamethasone，DEX)、苯巴比妥钠(Phenobarbitalsodium，PB)、β-奈黄酮(β-naphthoflavone，p一MF)]，另设无诱导剂的空白对照和溶剂对照。各组处理结束后24h，处死大鼠取肝脏，制备肝微粒体，测P450含量和CYP281活性；取各诱导组微粒体，用1．25mmol／LSKF525A处理，测CYP281活性。 (3)EXVIVO研究不同剂量Y射线照射和MMC对雄性SD大鼠肝脏微粒体中CYP281，CYP2E1活性影响： 空白组和经苯巴比妥(PB)诱导后大鼠，处理结束后24h，处死大鼠取肝脏，制备肝微粒体，微粒体分别进行2Gy、8Gy、16GyY射线照射；50μmol／L删C作用：Y射线照射后加MMC作用等处理，然后测定CYP281、CYP2E1活性。 2．丝裂霉素C对肝原代细胞的毒性作用及与细胞色素P450的相关性(D用兔肝原代细胞研究MMC细胞毒性作用： 新鲜分离兔肝细胞，在96孔板上贴壁培养，1d后将培养液换成不同浓度MMC药液，不同时间(14h、21h、45h、69h)作用及不同剂量(4Gy、8Gy、12Gy)γ射线照射后，用MTT方法测吸光值(∞值)，求得各自的ICso；另将新鲜分离肝细胞贴壁4d后，用Rifampcin(25μmol／L)、Omeprazole(50μm01／L)诱导2d，然后换不同浓度MMC药液继续培养48h，以不加诱导剂为对照，用MTT方法测吸光值，并求得各自的IC50。对于每块96孔板，设不同浓度的Tomaxifen阳性对照，不加药物的阴性对照，以及不加细胞的空白对照。 (2)用人肝原代细胞研究MMC细胞毒性作用 结果：L丝裂霉素C(删C)与大鼠肝脏细胞色素P450的相互作用 (1)INVIVO研究3GyY射线照射和MMC对雄性SD大鼠肝脏细胞色素P450含量、CYP281和CYP2E1活性的影响： 给MMClmg／Kgd，1d后大鼠肝脏微粒体的P450含量、CYP281活性变化无统计学差异(P＞O.05)，CYP2E1活性明显上升(P＜O.01)；连续3d或6d后，P450含量、CYP281、CYP2E1活性均无明显变化(P＞O.05)。给3mg/Kg的MMC1d，对P450含量、CYP281活性影响无统计学差异(P＞O.05)，CYP2E1活性上升明显(P＜O.01)；3GyY射线全身照射后，P450含量、CYP281活性无明显变化(P＞O.05)，CYP2E1活性下降(P＜O.05)：析因分析发现3mg／Kg删C与3Gyy射线之间没有交互作用。 (2)EXVlVO研究3种诱导剂对雄性SD大鼠细胞色素P450含量、CYP281活性的影响，以及SKF525A对不同活性CYP281的抑制作用： 阳作用后，大鼠肝脏微粒体P450含量上升(P＜O.05)，CYP281活性明显增加(P＜O.01)：与空白对照组和溶剂对照组相比，DEX、β-NF作用后，P450含量变化均无统计意义(P＞O.05)，但β-NF使P450含量有上升趋势；与空白对照组和溶剂对照组相比，DEX作用后，CYP281活性变化无统计意义(P＞O.05)，但有上升趋势；与空白对照组相比，β-NF组的CYP281活性增加显著(]KO．05)，但与溶剂对照组相比，无统计意义(P＞O.05)。SKF525A处理不同组别的微粒体后，CYP281活性均下降，其中NS组CYP2B1活性下降43．8％(P＜O.05)，Corn组下降54．0％(P＜O.05)，DEX组下降67．7％(P＜O.01)，PB组下降95．5％(P＜O.05)，β一NF组下降55．6％(P＜O.01)，MMC组下降32．3％(P＜O.05)。 (3)EXVIVO研究不同剂量Y射线照射和MMC对雄性SD大鼠肝脏微粒体中CYP281、CYP2E1活性影响： 大鼠肝脏微粒体中CYP281活性，在各剂量γ射线照射组和50μmol／LMMC作用组的变化没统计差异(P>O．05)；不同剂量Y射线对CYP2E1活性没有明显影响(P>O．05)，但MMC作用使各组CYP2E1活性明显下降(]KO．01)。两因素析因分析发现，对于CYP281、CYP2E1活性，Y射线照射和MMC作用之间没有交互作用。 2．丝裂霉素C对肝原代细胞的毒性作用及与细胞色素P450的相关性(D用兔肝原代细胞研究MMC细胞毒性的作用： 细胞培养ld后，加MMC，然后进行Ogy、4Gy、8Gy、12Gyγ射线照射，21h后测∞值：另外，MMC作用21h后进行12GyY射线照射，然后测OD值。IC5。分别为4．57μg／札、4．4lμg／Ml、6．51ug／札、5．12ug／札、4．32ug／Ml，可见各组Icg变化不大，8Gy照射组略有增大。随着MMC作用时间的延长，Icg逐渐减小，且随着时间推移，下降的幅度减小，作用14h、21h、45h、69h的IC5,分别为27．80μg／Ml、4．57ug／Ml、0．88μg／Ml、0．34μg／Ml。用Omeprazole诱导2d，CYPlA2活性提高到5．2倍，MMC作用48h，IC60是对照组的63．9％；Rifampcin诱导2d，CYP3A4活性提高到2．3倍，MMC作用48h，Icg是对照组的55．4％，Control、R25、050组Icg分别为7．90μg／Ml、4．38ug／Ml、5．05μg／札，可见各组IC50变化不很明显。新鲜细胞培养6d后加MMC作用48h，IC∞明显比培养1d后加MMC作用45h的大，IC50分别为7．90ugμl、0．88ug／札，增加了797．7％。 (2)用人肝原代细胞研究MC的细胞毒性作用：