12-表-欧乌碱对白血病细胞的抑制作用及其机制

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目的:探讨12-表-欧乌碱对白血病细胞K-562、HL-60细胞的抑制作用及其机制。方法:CCK-8法检测12-表-欧乌碱对K-562、HL-60细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测12-表-欧乌碱对K-562、HL-60细胞周期及凋亡的影响;Hoechst染色检测12-表-欧乌碱对K-562、HL-60细胞凋亡形态学的影响;Western blot 检测 12-表-欧乌碱对 K-562、HL-60 细胞内 caspase-3、Bcl-2、PI3K、AKT、P-AKT、mTOR蛋白水平的影响;同时,通过流式细胞术检测IGF-1对12-表-欧乌碱诱导K-562、HL-60细胞凋亡的影响;Western blot检测IGF-1对12-表-欧乌碱抑制K-562、HL-60细胞内PI3K、AKT、P-AKT、mTOR蛋白水平表达的影响。结果:通过CCK-8法检测发现,12-表-欧乌碱对K-562、HL-60细胞的增殖有抑制作用,且随着12-表-欧乌碱浓度增加其存活率逐渐降低,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),呈时间-剂量依赖性;通过流式细胞术检测12-表-欧乌碱对K-562、HL-60细胞周期的影响,结果显示,与对照组相比,12-表-欧乌碱组使K-562、HL-60细胞G1期细胞百分数增加,差异有统计学意义(P<0.05);通过流式细胞术、Hoechst染色检测12-表-欧乌碱对K-562、HL-60细胞凋亡的影响,结果显示,与对照组相比,12-表-欧乌碱组K-562、HL-60细胞凋亡率增加,且随着浓度增加凋亡率逐渐增加,差异具有统计学意义(P<0.05);同时,通过Western blot检测K-562、HL-60细胞内凋亡相关蛋白的表达量,结果显示,12-表-欧乌碱使K-562、HL-60细胞内caspase-3、Bcl-2表达量降低;进一步通过Western blot探讨其作用机制,检测发现12-表-欧乌碱使K-562、HL-60细胞内PI3K、AKT、P-AKT、mTOR表达量降低。此外,通过流式细胞术检测发现IGF-1抑制12-表-欧乌碱对K-562、HL-60细胞的凋亡的诱导作用;通过Western blot检测发现IGF-1抑制12-表-欧乌碱对PI3K、AKT、P-AKT、mTOR表达量的抑制作用。结论:12-表-欧乌碱可抑制白血病细胞的增殖,诱导其凋亡,阻滞其周期;其作用机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR通路有关。
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