近些年来,肿瘤发病率和死亡率居高不下,已成为医学领域研究的重点问题之一。研究表明血管生成是肿瘤生长所必须的过程,抑制血管生成是癌症治疗的一个很好的靶点。目前临床常使用的抗血管生成制剂价格昂贵,靶点单一,易产生耐药性,这严重影响了它们在临床上的应用。故寻找新的抗血管生成药物,已成为当前肿瘤治疗领域亟待解决的问题。中药历经上千年的临床循证,具有价格便宜,毒副作用小,作用靶点多等特点。中医传统理论认为癌症的发生与热毒内积有很大的关系,清热解毒药作为中医治疗癌症患者常用的一类中草药,故本研究采用转基因斑马鱼模型,以斑马鱼体节间血管生成为指标,研究31味清热解毒中药在同一浓度区间对斑马鱼胚胎血管生成的作用的影响。选择具有抗斑马鱼体内血管生成活性的中药重楼作为研究对象。以转基因斑马鱼异种移植的肿瘤IOD值和肠下血管(SIV)为指标,评价重楼提取物是否具有抗肿瘤血管生成活性;进一步探讨重楼皂苷类成分对斑马鱼血管生成的抑制作用,为抗肿瘤新药的研发提供参考。本论文的主要研究内容如下:第一章:选择转基因斑马鱼Tg(flk1:mCherry)为模型,以100ng/mL PTK787作为阳性对照药,考察31味中药分别在同一浓度区间(50μg/mL、100μg/mL、200 μg/mL)对6 hpf～72 hpf的斑马鱼体节间血管生成的影响。结果显示,白蔹和委陵菜在各自特定的浓度条件下可以促进斑马鱼体节间血管的生成。重楼在50μμg/mL、100μg/mL时可以减少斑马鱼体节间血管生成,山豆根在50μg/mL可以抑制斑马鱼体节间血管生成,紫花地丁在100 μg/mL时可以造成斑马鱼体节间血管的缺失,山慈菇在100 μg/mL、200 μg/mL时可以抑制斑马鱼体节间血管生成,穿心莲、大青叶在200μg/mL时可以抑制斑马鱼体节间血管生成。除对血管生成有作用外,穿心莲、大青叶、紫花地丁、山慈菇、山豆根都会对抑制斑马鱼幼鱼的生长发育,甚至造成斑马鱼幼鱼卵黄吸收延迟;重楼不会影响影响斑马鱼的生长发育,故选择重楼作为本课题的研究对象。第二章:以转基因斑马鱼为模型,研究重楼的不同提取物对斑马鱼血管生成活性的影响,结果表明:重楼水提物与重楼醇提物均具有抗斑马鱼血管生成的活性,且重楼醇提物的抑制作用更强。更进一步,以肿瘤的IOD值和肠下血管的面积为指标,考察不同浓度的重楼醇提物对斑马鱼体内抗病理性血管生成活性的影响,发现重楼醇提物在100ng/mL、200ng/mL、400ng/mL的浓度下,可以同时抑制转基因斑马鱼肠下血管和异种移植的人源肝癌肿瘤细胞的生成,且其抑制效果呈浓度依赖性。第三章:采用转基因斑马鱼模型,比较重楼中的主要活性成分重楼皂苷Ⅰ,重楼皂苷Ⅱ,重楼皂苷Ⅵ,重楼皂苷Ⅶ,重楼皂苷H这5种重楼皂苷对斑马鱼体内血管生成作用的影响。研究结果表明重楼皂苷H仅在100 ng/mL的浓度下对斑马鱼体节间血管生成有促进作用。重楼皂苷Ⅵ在50 ng/mL、100 ng/mL的浓度下对斑马鱼体节间血管有抑制作用;重楼皂苷Ⅶ仅在200ng/mL的条件下对斑马鱼体节间血管有抑制作用。重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ在100ng/mL、200ng/mL、400 ng/mL的浓度下,均能抑制斑马鱼体节间血管生成,也可以抑制肿瘤的生长及斑马鱼肠下血管的发育。因此重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ有继续研究开发的价值。本研究表明部分清热解毒药中对体内血管生成具有一定的作用。通过转基因斑马鱼模型与异种肿瘤移植模型的结合可以同时观察到中药对斑马鱼体内的血管变化和肿瘤血管的变化。本课题为重楼在临床中治疗肿瘤提供了体内的依据,为其活性成分重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ在以后的开发应用奠定了基础。