研究背景胃癌在国内是最常见的恶性肿瘤之一,患病率和死亡率都位居全国第三。分子靶向治疗已成为胃癌治疗的研究热点,其中HER2是第一个被证实有效的分子靶标。曲妥珠单抗是靶向HER2的单克隆抗体,通过抑制HER2相关通路来发挥抗肿瘤作用。在临床中,曲妥珠单抗显著延长了 HER2阳性转移性胃癌患者的总生存期,但大部分患者在治疗有效后1年内出现耐药。XB130是新发现的接头蛋白,能够激活肿瘤相关的多条信号通路,同时又被多种酪氨酸激酶如HER2、EGFR及SRC等磷酸化激活,因而广泛参与肿瘤生长过程,被认为是潜在的诊疗靶点。该课题主要研究XB130在胃癌曲妥珠单抗耐药中的作用及其分子机制。内容和方法1.以剂量递增法建立人曲妥珠单抗耐药胃癌细胞株,CCK8检测其对曲妥珠单抗的敏感性。2.Western blot 检测亲代/耐药细胞 XB130、AKT、p-AKT、SRC、p-SRC（Tyr416、Tyr527）及 PTEN 的蛋白水平,QRT-PCR 检测 XB130 和 PTEN 的表达水平。3.Co-IP检测亲代/耐药细胞XB130与PI3K p58α的结合作用;以SRC抑制剂处理耐药细胞,检测结合水平的变化。4.以XB130 shRNA、XB130 shRNA联合Myr-Akt分别转染耐药细胞,检测曲妥珠单抗敏感性和p-AKT表达的变化。5.以生物信息学方法预测XB130与PTEN的结合位点,荧光素酶报告基因实验检测XB130对PTEN基因的调控作用。6.以PTEN wt/mut、XB130 shRNA联合PTEN shRNA分别转染耐药细胞,检测曲妥珠单抗敏感性和p-AKT、p-SRC表达的变化。7.以亲代/耐药细胞、耐药细胞XB130 shRNA/NC分别建立荷瘤小鼠模型,经曲妥珠单抗处理后绘制肿瘤生长曲线,IHC检测肿瘤组织XB130、PTEN、SRC/p-SRC 的表达。8.收集经曲妥珠单抗治疗后进展的转移性胃癌患者的临床病理资料,IHC检测进展前后肿瘤组织XB130、PTEN、SRC/p-SRC表达的变化。9.使用 SPSS 17.0 和 GraphPad Prism 通过 ANOVA 或 Student’s t 检验（双侧）比较差异。数据以均值±标准差表示,P＜0.05即差异有统计学意义。结果1.曲妥珠单抗耐药胃癌细胞对曲妥珠单抗敏感性显著降低。2.耐药细胞的XB130、p-AKT、p-SRC（Tyr416）表达上调,PTEN表达下调。3.耐药细胞的XB130与PI3K p85α结合力增强,经SRC抑制剂作用后,二者结合力减弱。4.沉默XB130,耐药细胞的p-AKT表达下调,对曲妥珠单抗的敏感性增强;共转染XB130 shRNA和Myr-Akt,细胞对曲妥珠单抗的敏感性恢复。5.XB130与PTEN启动子存在结合位点,且负性调节PTEN基因转录。6.同时沉默XB130和PTEN,耐药细胞的p-AKT和p-SRC表达未下调,对曲妥珠单抗的耐药性恢复。7.XB130敲低组小鼠经曲妥珠单抗处理后,移植瘤生长减慢,其肿瘤组织的XB130和p-SRC表达降低,PTEN表达升高。8.临床上对曲妥珠单抗耐药的胃癌患者,其肿瘤组织的XB130、p-SRC表达升高,PTEN表达降低。结论1.XB130参与调控HER2阳性胃癌对曲妥珠单抗的耐药。2.XB130在SRC激酶介导下通过结合PI3K p85α磷酸化激活AKT调控曲妥珠单抗耐药的发生。3.XB130通过调节PTEN基因转录在SRC-XB130-PTEN之间形成正反馈环并介导曲妥珠单抗耐药的发生。4.体内动物实验和临床病例资料证实XB130参与调控HER阳性胃癌对曲妥珠单抗的耐药。