鹅细小病毒VP1基因的克隆、序列分析及表达载体的构建

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:txiu4hbky
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
GPV(Goose Parvovirus)依据其形态、生化及培养特性被划归为细小病毒科细小病毒属成员,引起雏鹅和雏番鸭高度致死性疾病,主要以消化道,尤其是小肠部位的典型病变为特征。许多国家都爆发过该病,所有分离的GPV抗原性相似。目前主要依据临床症状结合血清学、病毒学方法诊断该病,这些方法大多费时、费力,容易延误该病的治疗,需建立一种快速、简便、特异的诊断方法。该病的防制依赖疫苗和抗血清及卵黄抗体的使用。目前使用的疫苗分为种鹅用和雏鹅用的鹅胚和鸭胚化疫苗,这些疫苗在实际生产中发挥巨大作用,因其为全毒苗或弱毒苗,存在着潜伏感染,排毒散毒,毒力返祖的缺陷,基因工程疫苗的研制可解决上述问题。 GPV的三种结构蛋白VP1、VP2、VP3位于同一开放阅读框内,共用同一终止密码子,VP1包含了组成VP2、VP3的所有氨基酸,因其具有这一特殊性,成为本研究的目的基因。本试验参照Genbank中发表的GPV B株基因序列设计并合成了扩增GPV H1株VP1的一对引物,利用PCR技术扩增出长约2.2Kb的目的片段,经酶切鉴定后,将其插入原核表达载体pPRoEXHTb的XbaⅠ、XhoⅠ多克隆位点间,构建了GPVH1株VP1的原核表达载体GP1-pPRO。测序结果表明GPVVP1基因由2199个核苷酸组成,编码732个氨基酸。与B株、YG株进行了同源性比较,核苷酸同源性分别为98.5%,93.18%;氨基酸同源性分别为98.09%,95.77%。同时将该目的基因插入到杆状病毒表达系统的供体质粒pFASTBACHTb的XbaⅠ、XhoⅠ多克隆位点间,经酶切、PCR鉴定后,将重组的供体质粒GP1-FAST转化到含有杆状病毒和辅助质粒的DH10BAC感受态细胞中,获得了表达GPV H1株VP1的重组杆状病毒GP1-BAC。 用Antheprot5.0对GPVH1株VP1、VP2、VP3及B、YG株VP1的二级结构、抗原性进行预测及比较,表明GPVH1株VP1、VP2、VP3共同部分的二级结构、抗原性无差别:GPVH1、B、YG株VP1的二级结构、抗原性存在差别。GPVH1株与其他细小病毒VP1的氨基酸序列同源性比较证明GPVH1与依赖病毒AAV-2的同源性高于与自主细小病毒的同源性。 本试验为进一步研究GPV的分子生物学特性,VP1的理化特性、生物学活性奠定了基础:为GPV的诊断试剂、基因工程疫苗的研制做了前期工作:同时为GPV的分类地位及其进化关系提供了佐证。
其他文献
猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PRV)是无囊膜、分节段的双股RNA病毒,隶属于呼肠孤病毒科,是引起幼年仔猪发生腹泻的主要病原之一。猪轮状病毒感染世界各地分布广泛,给养猪业
我们研究小组成功构建了以ThyA基因为选择压力的乳酸杆菌非抗生素抗性表达载体pW425t,并成功的表达了鸡球虫SO7基因,为了进一步验证该载体表达小分子蛋白质药物的功能,特地进