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本研究以‘长营’橄榄叶片为材料,采用RT-PCR和RACE技术,克隆出C4H基因的全长以及PAL和4CL基因的片段。为进一步从分子角度探讨这些基因与黄酮合成的关系,揭示黄酮合成的分子机理,为今后橄榄叶黄酮类化合物的开发利用奠定理论依据。研究结果如下:1采用RT-PCR和RACE技术克隆了橄榄叶片C4H基因全长橄榄叶片C4H基因cDNA全长为1819 bp,其中包含一个完整开放阅读框为1518 bp,编码505个氨基酸,分子量57.837 kD,等电点9.72;5′非编码区为63 bp,3′非编码区为238 bp。将橄榄叶片C4H全长用BLAST软件比对,结果表明,该序列与杨树C4H基因家族、柑橘、木棉、树莓、茶同源性比较高,分别为82 %、82 %、81 %、80 %、81 %;并对其氨基酸序列进行比对发现,橄榄叶片的C4H蛋白与杨树相似性最高为93 %,其次是柑橘和木棉,为92.7 %,而与拟南芥的相似性最低,仅有81 %。该基因在GenBank中登录号为FJ821504。经保守区功能区的分析,推导出C4H蛋白拥有一个完整的P450保守区,推测C4H蛋白是一种细胞色素蛋白。2采用RT-PCR和RACE技术克隆了橄榄叶片PAL基因cDNA片段从橄榄叶片中克隆得到的PAL基因片段长2172 bp,已经在GenBank上登录,登录号为FJ821505。经BLAST软件分析表明,PAL基因的编码产物与许多植物的PAL蛋白具有很高的同源性;并对保守功能区进行了分析,推导出PAL片段含有三个相似的结构功能区域,即PAL-HAL、Lyase_I_like家族和PAL,这三个区域都具有脱氢丙氨酰基的亲电中心部位,这些相似结构区域可能与它的性质和功能密切联系。3采用RT-PCR和RACE技术克隆了橄榄叶片4CL基因cDNA片段在橄榄叶片中克隆得到的4CL基因片段长为360 bp,经BLAST软件分析表明,该片段与许多植物的4CL基因具有很高的同源性;经在线的BLAST软件分析,该序列与杨树、枇杷、烟草、山毛榉、甜椒、拟南芥的4CL基因同源性较高。除了甜椒、拟南芥而外,它们的同源性高达80 %以上。该序列已在GenBank上登录,登录号为FJ821503。并对保守功能区进行了分析,推导出4CL片段含有一个残缺的保守机构区域,即LuxE家族酶功能区。综上所述,可能在橄榄叶黄酮合成中具有重要的地位的C4H、PAL、4CL这三个基因的克隆将有利于橄榄叶片黄酮的进一步开发和利用。