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目的通过研究昼夜节律基因及自噬相关基因在卵巢癌OVCAR3细胞及其顺铂耐药细胞株OVCAR3/DDP中表达的差异性与相关性,探讨细胞自噬在昼夜节律基因介导卵巢癌OVCAR3细胞对顺铂产生耐药中的作用及可能机制。方法利用表达谱芯片技术筛选卵巢癌耐药细胞株OVCAR3/DDP与非耐药细胞株OVCAR3之间表达差异明显的昼夜节律基因和自噬相关基因,通过RT-qPCR进行验证;Western blot检测OVCAR3/DDP与OVCAR3细胞株之间自噬相关基因LC3、BECN1与P62表达的差异性;细胞免疫荧光观察两种细胞LC3蛋白分布及表达量的不同;含有0μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml顺铂浓度的培养基分别培养OVCAR3细胞12 h、24 h、48 h后RT-qPCR检测昼夜节律基因(CLOCK、PER1、CRY2)、自噬相关基因(LC3、BECN1、P62)及mTOR基因mRNA的表达变化,Western blot检测LC3、BECN1和P62蛋白表达的变化;雷帕霉素处理OVCAR3细胞24 h后RT-qPCR检测昼夜节律基因(CLOCK、PER1、CRY2)、自噬相关基因(LC3、BECN1、P62)及mTOR基因mRNA的表达情况,Western blot检测LC3蛋白表达变化。结果1.表达谱芯片结果显示,与OVCAR3细胞株相比,卵巢癌OVCAR3/DDP细胞株中表达差异性明显的自噬相关基因共13个(其中11个表达上调,2个表达下调),昼夜节律基因共6个(全部表达上调)。2.RT-qPCR验证表达谱芯片结果提示差异性表达的基因mRNA在OVCAR3及其耐药细胞株OVCAR3/DDP中均有表达,其中昼夜节律基因(CLOCK、PER1、CRY2)、自噬相关基因(LC3、BECN1、P62)及mTOR基因mRNA的表达水平在两种细胞株中具有显著差异性,与芯片结果基本一致,差异有统计学意义(P<0.05)。3.细胞免疫荧光结果提示OVCAR3/DDP细胞中有大量LC3蛋白表达在细胞核周围,OVCAR3细胞中LC3蛋白表达明显较少。4.Western blot结果提示耐药细胞株OVCAR3/DDP与非耐药细胞株OVCAR3相比,BECN1和LC3蛋白表达升高,LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化增强,P62蛋白表达减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。5.随着顺铂处理OVCAR3细胞时间的延长与浓度梯度的提高,CLOCK、PER1、CRY2、BECN1和LC3 mRNA的表达水平均上调,mTOR、P62 mRNA的表达水平下调,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot结果提示LC3蛋白表达增强,而mTOR、P62蛋白表达减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。6.雷帕霉素处理OVCAR3细胞后RT-qPCR检测CLOCK、PER1和CRY2mRNA的表达水平无明显变化,BECN1和LC3 mRNA的表达水平明显上调,P62和mTOR mRNA的表达水平明显下调;Western blot结果提示LC3蛋白表达显著升高。结论1.利用表达谱芯片、RT-qPCR及Western blot等不同检测方法从分子与蛋白水平检测均证明昼夜节律基因(CLOCK、PER1、CRY2)、自噬相关基因(LC3、BECN1、P62)及mTOR基因在卵巢癌OVCAR3细胞株及其顺铂耐药细胞株OVCAR3/DDP中表达具有差异性。2.昼夜节律基因与自噬相关基因在卵巢癌OVCAR3细胞株及其顺铂耐药细胞株OVCAR3/DDP中表达具有相关性。3.昼夜节律基因可能通过mTOR信号通路调控自噬影响卵巢癌OVCAR3细胞对顺铂的敏感性。