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植物内生真菌是指存在于健康植物体内或其生活史的一定阶段处于植物体内的真菌,包括菌根真菌和植物病原菌。也有人认为内生真菌是指整个生活史或生活史的某个阶段,侵入植物组织内,而不表现明显病症的真菌。内生真菌与其宿主植物表现为互惠共生的关系,其代谢产物十分丰富。近年来研究表明植物内生真菌能够产生结构新颖、功能特殊的次生代谢产物,是新化合物、新药物的潜在资源。鉴于植物内生真菌的特点及性质,本文选择药用植物八角茴香为研究材料,开展了八角茴香植物内生真菌的分离及鉴定、重点是抗菌活性菌株的筛选研究,并选择活性强且稳定的菌株进行活性代谢产物的基础化学研究。主要取得以下结果:
分离自云南金平地区的51株八角茴香植物内生真菌鉴定为5目,8科,27属;河口地区31株划分4目5科,16属;而富宁地区42株则被纳入5目,6科,25属中,结果显示不同地理的三个区域八角茴香植物内生真菌种群组成与分布多样性有着明显的差异。
上述八角茴香植物内生真菌抗菌试验表明,24株内生真菌对供试细菌、植物病原真菌和皮肤致病真菌中的一种或多种病原微生物有抑制生长作用,其中有12株内生真菌显示出较强的抑菌活性,除类型外,还显示出内生真菌抑菌活性与地理环境和气候条件呈相关的特点。
对抑菌谱较广,而且生物活性作用稳定的菌株Ym312226进行了进一步的分类鉴定,通过菌落形态、显微形态特征的观察以及ITS序列测定和分析,鉴定该菌株为子囊菌亚门、腔孢纲、黑盘孢目、刺盘孢属的柑桔炭疽刺盘孢菌。
对菌株Ym312226的发酵条件进行了初步的研究。通过正交试验获得最佳的发酵条件组合,并按此组合制定其发酵工艺。通过扩大发酵实验,探究了菌株Ym312226的发酵工艺和条件。同时在处理发酵产物的过程中,亦对发酵产物和菌体代谢产物进行了对比试验。
对菌株Ym312226的主要发酵产物进行了化学分离和结构分析,获得了三个单体化合物。其中化合物CY8-1为1-0-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E,8E,2’R,)-2-N-(2’-羟基棕榈酰)-9-甲基-4,8-sphingadienine,即脑苷脂B(Cerebroside B);化合物CY4-83-95为1,2,3,4-丁四醇,即赤藓醇(Erythritol);CY4-1单体经测定具有抗菌活性,初步鉴定为-新化合物,6-(3,7-二羟基-十三烷)-5-羟基-5,6-二羟基-吡喃-2-酮,但最终确定还需要进一步的验证。