【摘 要】
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该研究利用传统微生物学的方法,从南宁市广西大学田的土样中筛选到一株甲烷利用细菌Y2(83),能够在以甲烷为唯一碳源和能源的无机培养基上生长,通过形态观察及16SrRNA编码序列
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该研究利用传统微生物学的方法,从南宁市广西大学田的土样中筛选到一株甲烷利用细菌Y2(83),能够在以甲烷为唯一碳源和能源的无机培养基上生长,通过形态观察及16SrRNA编码序列同源性比较分析,我们初步鉴定该菌株为甲基孢囊菌.通过对Y2(83)菌株在不同温度、pH值条件下的生长的情况,我们初步确定了Y2(83)的最适生长和降解苯酚的温度为32℃,最适pH值为7.0,TCE最高的耐受浓度为30mg/L.苯胺最高的耐受浓度为1500mg/L.苯酚最高的耐受浓度为800mg/L.根据可溶性甲烷单加氧酶(sMMO)所共有的保守序列设计合成了一对引物,以Y2(83)总DNA为模板,通过PCR反应,扩增出242bp的同源片段.对该DNA序列测序,并通过序列分析表明,该片段与已报道的可溶性甲烷单加氧酶的编码基因中的mmoX有85％的同源性.以此DNA片段为探针,通过Southern blot的方法,从用部分酶切的Y2(83)总DNA中获得阳性印迹,确认其可溶性甲烷单加氧酶的编码基因的位置,进而构建了Y2(83)可溶性甲烷单加氧酶的编码基因文库.通过菌落原位杂交,找到一个含有可溶性甲烷单加氧酶的编码基因的阳性克隆,为进一步研究可溶性甲烷单加氧酶工程菌打下基础.
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