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目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂恩替诺特(Entinostat,MS-275)对HPAF-Ⅱ和Mpanc 96两种胰腺癌细胞诱导凋亡作用,进一步探讨MS-275体外诱导胰腺癌细胞凋亡的相关分子机理,为MS-275在胰腺癌治疗的临床应用提供可参考的理论依据。方法:1、以胰腺癌细胞系HPAF-Ⅱ和Mpanc 96为研究对象,胰腺癌细胞的培养使用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基,置于5%CO2、37℃的饱和湿度的温箱中培养。观察胰腺癌细胞的形态及被MS-275处理后显微镜下的变化。2、用MTS法分别检测在不同MS-275浓度条件下处理72h后HPAF-Ⅱ和Mpanc 96两种胰腺癌细胞的存活情况,计算MS-275分别作用两种胰腺癌细胞的IC50,并根据实验组与对照组的存活比率绘制存活曲线进行比较分析。3、用Western Blotting检测同一MS-275浓度不同作用时间下HPAF-Ⅱ和Mpanc 96两种胰腺癌细胞凋亡信号通路相关蛋白Akt、pAkt、MAPK、pMAPK、mTOR、pmTOR、Survivin、PARP、Caspase-3等的表达情况,对其表达情况的不同进行比较分析。结果:经MS-275处理过的胰腺癌细胞形态学上呈现凋亡特征。MTS法检测发现,HPAF-Ⅱ和Mpanc 96两种胰腺癌细胞均随着MS-275浓度增加而出现细胞存活比率递减。MS-275对HPAF-Ⅱ和Mpanc 96细胞的IC50分别为1.64 uM/L及3.61 uM/L。Western Blotting结果显示MS-275作用可下调HPAF-Ⅱ和Mpanc96细胞内Akt和mTOR的磷酸化水平,提示PI3K/AKT/mTOR信号转导通路被特异性地抑制;同时Survivin蛋白的表达水平显著降低,而凋亡指示蛋白PARP和Caspase-3蛋白的降解水平随着MS-275作用时间延长而增强,这表明MS-275诱导两种胰腺癌细胞HPAF-Ⅱ和MPanc 96的凋亡效应存在明显的作用时间依赖性。结论:MS-275在体外实验中能有效呈浓度及作用时间依赖性地抑制HPAF-Ⅱ和Mpanc 96两种胰腺癌细胞的增殖并诱导细胞凋亡。在HPAF-Ⅱ及Mpanc 96两种胰腺癌细胞中存在PI3K/Akt/mTOR信号转导通路的激活。MS-275诱导胰腺癌细胞凋亡的机制与阻断PI3K/AKT/mTOR信号通路、下调Survivin蛋白表达从而激活Caspase-3有关。本研究为组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275作为抗胰腺癌药物的开发和应用奠定理论基础。