从河南某猪场发生疑似伪狂犬病（Pr）的仔猪体内无菌采取病料（脑、淋巴结、三叉神经、肝脏和肾脏等组织），研磨，离心，上清液加入青、链霉素至终浓度为1000u/ml，接种长成单层的PK15细胞，连续传4代，均能产生明显的细胞病变（CPE）；取病料悬液和细胞培养液接种家兔进行动物实验，家兔没有表现出典型的Pr症状，接毒后20天利用猪伪狂犬病乳胶凝集检测试剂盒检测到伪狂犬病病毒（Prv）抗体，滴度达1:4－1:16。参考GeneBank公布的猪伪狂犬病病毒的PK基因序列，自行设计了一对针对Prv PK基因的引物，进行聚合酶链式反应（PCR），在该份病料和第4代细胞培养液中均可检测到预期大小的全长目的基因片段。以上试验证明分离到了河南地方株Prv，命名为豫A（Yu A）株。利用上述引物，对来自河南省的另一份疑似Pr病料以及闽A（MinA）株细胞毒进行PCR扩增，均扩增到了全长目的基因片段，将三份扩增产物分别克隆于pMD 18-T 载体，对重组质粒作PCR、酶切分析和序列测定，证实了克隆片段的特异性。重组质粒分别命名为MinA-PK、YuA-PK和YuB-Pk。三个序列已被Genebank收录，收录号分别为：AY590265、AY644398、AY644399。借助生物学分析软件，将 Prv MinA株,YuA株和 YuB株 PK基因的核苷酸序列与已被Genebank收录的 Prv Er 株、NIA-3 株及Ka株的 PK 基因核苷酸序列进行同源性和差异性比较，六个 Prv 毒株 PK 基因核苷酸序列间具有很高的同源性，最低者为YuA株和Ka株，其同源性为97.1％；YuA株在282位比其它毒株少一个G ，导致缺失突变，93位以后氨基酸序列的同源性大大降低，该毒株与MinA株，YuB株，Er株，Nia-3和Ka株同源性分别降为30.7％，30.7％，30.2％，29.5％,19.5％，明显低于其它组间的最低值 86.1％，分离毒对家兔的不致病性可能与该位点的缺<WP=6>失突变有一定关系。以NiA-3株为标准，在其 238 至 249位是一个高变区，在 1081至 1098 位有一个高变区，这两个高变区没有打乱读码框，也没有破坏PK激酶的保守氨基酸位点，推测这两个区域对于PK激酶结构的稳定性和功能的发挥是非必需的。 本实验为了解河南省的Prv特性、分子流行病学、毒株之间的进化关系、进一步了解PK基因的功能和构建PrvPK缺失株奠定了基础，并为用Prv PK基因构建载体制备基因工程多价苗提供了新的思路和参考依据。