景天三七中总黄酮的提取分离及抗氧化活性研究

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景天三七又名土三七,见血散等,景天科景天属多年生草本,具有止血化瘀,抗氧化、抗肿瘤、降血压、降血脂等作用。本文主要研究了超声波辅助提取法提取景天三七中的总黄酮,并采用响应面方法对提取工艺进行了优化,利用大孔吸附树脂和硅胶柱进行了分离纯化,对分离得到的样品进行了HPLC、UV和LC-MS等研究分析。并研究了它们的抗氧化活性。选取了提取温度、乙醇体积分数、液料比作为响应面的条件,进行优化,得出最佳提取工艺条件为:提取时间为20min,提取温度为57℃,乙醇浓度为80%,液料比(mg/g)为20:1。通过验证实验得出景天三七提取液中的黄酮含量为24.87+0.26mg/g。通过静态吸附实验筛选出最佳纯化树脂为D-101大孔吸附树脂,并考察了不同上样液pH值对吸附和解析的影响以及不同浓度乙醇溶液的洗脱实验,结果表明用浓度为30%和50%乙醇洗脱液洗脱效果最佳,能将大多数D-101大孔吸附树脂的景天三七黄酮组分洗脱下来。乙醇洗脱再通过硅胶柱进行反复分离纯化得到单体组分,通过HPLC,UV以及LC-MS对单体组分检测分析,参照槲皮素标准品,判定该单体物为槲皮素衍生物。采用DPPH的方法分别考察了超声波辅助提取得到的黄酮初提液、大孔树脂纯化洗脱的黄酮组分以及硅胶柱分离纯化得到的单体组分的抗氧化能力,以抗坏血酸作为标准。研究发现:黄酮初提液抗氧化能力最弱,浓度为30%和50%乙醇洗脱部分的样液抗氧化能力相比黄酮初提液要强,单体部分的抗氧化能力很强,当浓度达到2mg/mL时,其DPPH自由基清除率为94%,与抗坏血酸DPPH自由基清除率相当。
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