论文部分内容阅读
丝氨酸蛋白酶抑制因子(Serpins)属于一个对丝氨酸蛋白酶水解有抑制作用的蛋白大家族,它们中的大部分可以控制蛋白酶介导的生理过程并且可调节丝氨酸蛋白酶。迄今为止,从动物、植物、细菌和病毒体内鉴定出超过800种Serpins。为了探究Serpin1在昆虫免疫中的功能,本文通过已制备的亚洲玉米螟Serpin1的多克隆抗体,利用间接免疫荧光标记以及Western blot技术来检测Serpin1在亚洲玉米螟幼虫不同组织的分布情况,为进一步研究Serpin在PPO激活系统中的功能和作用机制提供基础,并有助于发现昆虫发育和免疫反应中的蛋白质酶激活途径。本文的间接免疫荧光标记实验结果表明：在粒血细胞、浆血细胞和类绛色细胞中Serpin1蛋白呈现绿色荧光,细胞表面有Serpin1蛋白的表达。根据Western blot实验杂交得到的条带深浅粗细可以判断Serpin1在体壁中表达量最高,然后是血淋巴,再者是脂肪体,中肠表达量最低。采用胶体金标记的免疫电镜观察,统计分析10个视野内金颗粒数,检测Serpin1蛋白的表达情况。实验表明：Serpinl在体壁中表达量最高,其次是脂肪体,中肠中最少。昆虫储存蛋白(storage protein, SP)是一种由6个亚基聚合而成的球形六聚体蛋白,同血蓝蛋白有很大的同源性。储存蛋白是昆虫作为营养物质储存起来供以后使用的一种蛋白质,它是全变态昆虫幼虫主要的体液蛋白,作为氨基酸储存库对成虫变态发育和雌性卵发育起着重要的作用。为了进一步研究储存蛋白的生化特性,我们利用从亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis 5龄幼虫体内克隆获得的SP基因,构建pET-30a-SP原核表达载体,对原核表达条件进行优化,在大肠杆菌中重组表达了亚洲玉米螟SP蛋白。