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目的：探索miRNA在不同骨肉瘤细胞系中的表达特征及差异,明确骨肉瘤细胞miRNA的共同表达谱,并为后续的机制研究提供方向指导。方法：收集四种人骨肉瘤细胞系(U-20S, Saos-2, MNNG/HOS, MG63)和人成骨细胞系(hFOB),提取细胞中的总RNA,应用miRNA表达谱芯片进行扫描筛查分析,建立骨肉瘤细胞系的miRNA表达谱。结果：应用miRNA表达谱芯片检测四种人骨肉瘤细胞系(U-2OS, Saos-2, MNNG/HOS, MG63)和人成骨细胞系(hFOB)之间具有差异性表达特点的miRNA。我们发现：相对于人成骨细胞系,在四种人骨肉瘤细胞系中表达差异达2倍及以上的miRNA共有27个,其中表达水平上调的miRNA共有23个(let-7e-5p, miR-20b-5p, miR-92a-3p, miR-125a-5p, miR-196a-5p, miR-214-3p, miR-20a-5p, miR-181a-5p, miR-29b-3p, miR-10b-5p, miR-301a-3p, miR-181d, miR-21-5p, miR-206, miR-7-5p, miR-29a-3p, miR-17-5p, miR-210, miR-25-3p, miR-18a-5p, miR-181c-5p, miR-32-5p, miR-27a-3p),表达水平下调的miRNA共有4个(miR-142-5p, miR-133b, miR-16, miR-144-3p)。结论：通过miRNA表达谱芯片的检测与筛选,我们发现与人成骨细胞系相对比,在四种入骨肉瘤细胞系(U-2OS, Saos-2, MNNG/HOS, MG63)共有27个miRNA呈差异性表达的特点。这些具有差异性表达的miRNA可以为进一步研究miRNA在骨肉瘤中的作用与功能提供一定的实验基础及方向指导。目的：观察miR-27a对骨肉瘤细胞增殖、凋亡和侵袭影响及其调控机制。方法：利用Lipofectamine(?)2000将miR-27a inhibitor、miR-27a negative control、 miR-27a mimics和miR-27a mimics control转染于骨肉瘤细胞系。利用Caspase-3、8和9酶活性试剂盒检测检测Caspase-3、8和9酶活性,流式细胞检测各组细胞的凋亡情况,MTT实验检测对细胞增殖的影响,Transwell迁移与侵袭实验评价细胞迁移侵袭能力,细胞克隆形成实验评价骨肉瘤细胞克隆形成的能力,qRT-PCR和Western blot检测骨肉瘤细胞PUMA、BAK和BAX表达情况。建立裸鼠皮下骨肉瘤瘤模型,绘制肿瘤生长曲线,测量肿瘤体积以及肿瘤重量,qRT-PCR和Western blotting检测PUMA、BAK和BAX表达情况。结果：与其他组相比,miR-27a inhibitor组骨肉瘤细胞的Caspase-3、9酶活性显著增加(P<0.01),Caspase-8酶活性也有增加(与无转染组对比P<0.05),细胞的凋亡率显著增加(P<0.01),增殖明显受到抑制(P<0.01),迁移显著减少(P<0.01),细胞的穿膜细胞数显著减少(P<0.01),细胞的克隆形成数目显著减少(P<0.01)。miR-27a的表达水平与PUMA蛋白表达呈显著的负相关性,荧光素酶报告法证实PUMA基因的3’UTR可以被miR-27a结合。动物实验结果发现,miR-27a inhibitor组裸鼠的肿瘤大小、体积及生长速度比miR-27a inhibitor negative组显著减小(P<0.01)。结论：PUMA是miR-27a的靶基因,抑制miR-27a表达引起PUMA表达上调使骨肉瘤细胞Caspase-3、8和9酶活性增加,凋亡增加,并且可以抑制骨肉瘤细胞增殖、减少骨肉瘤细胞侵袭与迁移,减少骨肉瘤细胞克隆的形成,而且抑制裸鼠的肿瘤生长。