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乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染已经成为全球面临的难题,HBV慢性感染可能导致肝硬化和肝细胞癌。乙型肝炎的病程十分复杂,可受到多种因素影响,例如感染的HBV的基因型、突变位点和复制水平,患者的性别、年龄和免疫应答强度等。其中宿主的免疫应答在HBV感染进程中发挥着重要作用,HBV感染的慢性化与机体对病毒的免疫应答低下密切相关,但具体作用机制尚未完全清楚。全面而深入地认识HBV感染发生、发展过程及机体免疫防御机制,是发展有效的乙肝治疗和干预策略的前提。清道夫受体A(scavenger receptor A,SRA)是天然免疫中一个重要的模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR),主要表达于不同组织和器官的巨噬细胞上,尤其是胃肠道粘膜固有层巨噬细胞、肝内kupffer细胞及肺内肺泡巨噬细胞,人肝细胞亦表达SRA。SRA作为细胞表面的内吞受体介导细胞识别和摄取“非己”成分被广泛认同,近些年越来越多的研究表明SRA具有免疫调节作用;然而,鲜有SRA调节病毒感染免疫的研究,未见其调节HBV感染免疫的报道。我们在前期研究中发现,SRA在维持肝组织免疫微环境稳定中扮演着重要角色;乙肝患者肝组织及血清中均可检测出SRA的高表达并且可溶性SRA蛋白可减弱抗HBV特异性CD8+ T细胞效应。HBV复制过程中,其DNA或RNA分子能够被细胞内部的各类感受器识别,通过下游一系列的信号传递机制,产生Ⅰ型及Ⅲ型干扰素(interferon,IFN),起到抑制病毒复制的作用。Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)、黑色素瘤分化相关基因 5(melanoma differentiation associated gene-5,MDA5)和视黄酸诱导基因Ⅰ(retinoic acid-inducible gene-Ⅰ,RIG-Ⅰ)都是重要的病毒RNA感受器,并且参与宿主抗病毒免疫反应。TRAF3(TNF receptor-associated factor 3)是抗病毒天然免疫信号通路中的关键接头蛋白。细胞内MDA5分子识别入侵病毒的dsRNA后,细胞内RIG-Ⅰ分子识别入侵病毒的ssRNA和dsRNA之后,募集配体IPS-1及TRAF3,通过下游通路的进一步信号传递,协同促进Ⅰ型IFN的表达。本项目研究中,我们利用含有HBV1.3基因序列的质粒pHBVl.3高压尾静脉注射建立HBV感染的小鼠模型。与野生型(wild type,WT)小鼠相比,SRA基因缺陷(SRA-/-)的小鼠在感染HBV后,对抗原的清除能力增强,HBV复制能力减弱,相关抗病毒因子(IFN-α、TNF-α)的表达量增加。在体外实验中,我们使用可稳定表达HBV抗原的人源肝稳转细胞系Hep G2.2.15,或PEI负载pHBV1.3转染人源肝细胞系HepG2,模拟HBV感染肝细胞。与正常肝细胞相比,敲低SRA表达的肝细胞对HBV的免疫应答较强而过表达SRA的肝细胞对HBV免疫应答效应减弱。因此,我们初步推测SRA对HBV诱导的天然免疫应答具有负向调控作用。机制研究发现,SRA可抑制天然免疫系统中的重要抗病毒信号通路MDA5/RIG-Ⅰ通路的下游转录因子IRF3和IRF7的磷酸化和核转移水平,因此推测SRA可能通过调控MDA5/RIG-Ⅰ通路进而参与调节抗HBV的Ⅰ型免疫应答。为验证这一猜测,我们探究了 SRA与MDA5/RIG-Ⅰ通路中重要接头蛋白TRAF3的关系。实验发现,SRA可与TRAF3直接结合,并抑制其发生K63泛素化。由于目前还未见SRA具有去泛素化酶活性,因此我们推测SRA借助其他去泛素化酶分子发挥这一作用。经探究发现,SRA可与去泛素化酶OTUB1直接结合,并增强OTUB1与TRAF3的直接结合作用。综上,我们推断,在HBV活化的MDA5/RIG-Ⅰ通路中,SRA可通过与TRAF3直接结合,并招募OTUB1,抑制TRAF3发生K63泛素化,从而阻止抗病毒信号向下游传递,进而抑制转录因子IRF3和IRF7活化,最终导致Ⅰ型抗病毒应答水平降低。