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目的:肿瘤在侵袭过程中介导的免疫抑制是限制抗肿瘤免疫治疗发展的主要因素之一。为了产生更强而有效的抗肿瘤免疫反应,本文一方面通过构建负载肿瘤裂解物(TLS)和免疫刺激物单磷酰脂质A(MPLA)的羟基磷酸锌(LZnP)纳米疫苗来激活机体免疫系统,另一方面利用肿瘤免疫检验点抑制剂(~DPPA-1)来拮抗肿瘤表面表达的程序性死亡分子1配体(PD-L1)从而瓦解肿瘤介导的免疫抑制。通过联合治疗方案能够有效的引起特异性抗肿瘤免疫反应,降低肿瘤免疫逃逸现象,抑制肿瘤生长。方法:通过反复冻融的方式获得B16F10的肿瘤相关裂解物,并利用SDS-PAGE进行相关蛋白分析。利用反相微乳法和薄膜水化法制备负载TLS和MPLA的羟基磷酸锌(LZnP)纳米疫苗。分别通过透射电镜、红外分析、光动态散射、BCA蛋白检测等研究纳米疫苗的相关理化性质以及抗原包载能力。通过流式细胞仪检测技术对纳米疫苗针对树突状细胞(DC)的免疫熟化效能以及T细胞的促分化增殖能力进行评价。同时利用ELISA试剂盒检测细胞因子的分泌评价纳米疫苗的免疫效应。利用B16F10黑色素瘤细胞构建小鼠肿瘤模型,对负载肿瘤裂解物的纳米疫苗以及联合免疫检验点疗法的抗肿瘤效果进行评价。结果:经过反复冻融的TLS含有绝大部分来自于B16F10的蛋白,能够作为抗原应用于肿瘤治疗当中。负载TLS的羟基磷酸锌(LZnP)纳米疫苗粒径30 nm左右,具有规整的形貌和良好的均一性,TLS包载能力能达到66%。体外实验结果显示该纳米疫苗能够成功地刺激小鼠原代DCs熟化并提高相关细胞因子分泌。在肿瘤的预防和治疗实验中,纳米疫苗同免疫检验点疗法的联合治疗能够取得显著的抗肿瘤效果。结论:反复冻融的TLS保留了大部分来自于B16F10的抗原信息,能够提供较多的抗原表位供T细胞识别,从一定程度上减少肿瘤逃逸。通过构建LZnP纳米疫苗,TLS和佐剂能够被有效地递送至淋巴器官。该纳米疫苗能够促进DCs熟化,增强DCs对肿瘤相关抗原的摄取、处理以及呈递,诱导T细胞分化增殖。引入免疫检验点疗法与纳米疫苗协同抗肿瘤,能够有效的避免肿瘤引起的T细胞免疫耐受现象,从而更好协同纳米疫苗产生强而有效的T细胞抗肿瘤免疫反应,提升疫苗治疗效果。