平菇降解黄曲霉毒素的研究

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黄曲霉毒素(Aflatoxins, AFT)是一类真菌有毒次级代谢产物,有致癌、致畸、致突变的作用,被世界卫生组织癌症研究机构划定为甲类致癌物。广泛存在于花生、玉米等农作物中,不仅对人和动物的健康造成严重的危害,也给我国的出口贸易带来巨大的经济损失。本实验旨在筛选能够高效降解黄曲霉毒素的可食用菌株。本研究通过改进溶剂(正己烷脱脂)法提取AFB1,并用黄曲霉毒素B1ELISA检测试剂盒测定AFB1的含量,当添加AFB1的量为500ng、1000ng时,其回收率分别达到94.88%、93.04%,且相对标准偏差均小于5%,因此,用改进溶剂法提取AFB1和用ELISA检测试剂盒测定AFB1含量的方法可行。本研究通过观察平菇在愈创木酚选择培养基平板(GLDS)和α-萘酚选择培养基平板(NLDS)上的生长情况、变色圈的大小、颜色深浅等特征,从8株平菇中初步筛选到高产漆酶的菌株5株;并将5株菌株在液体培养基中进行发酵培养产漆酶,通过测定发酵液中漆酶的活性,筛选到高产漆酶的菌株2株,为平菇P1和平菇P2,经降解AFB1后,发现平菇P1的降解能力,790μL发酵液可以降解700.89ng AFB1。研究发现,平菇P1降解AFB1的能力与产漆酶的能力的关系呈很高的正相关性,降解AFB1的能力随漆酶活性的升高而升高,随活性降低而降低。平菇P1发酵液进行15min热灭活,测定灭活后漆酶的活性及降解AFB1的能力,发现漆酶活性完全消失,790μL平菇P1发酵液降解1000ngAFB1,降解率从75.82%降低到0.53%。本实验还对平菇P1降解其他黄曲霉毒素的能力进行研究,通过用HPLC检测发现,950μL平菇P1发酵液,可以将50μL AFT标准品(AFB11μg/mL,AFB23μg/mL,AFG11μg/mL,AFG23μg/mL)溶液中的四种黄曲霉毒素全部降解,并生成两种新的物质。950μL平菇P1发酵液与50ngAFM1标准品溶液孵育后,HPLC检测AFM1,AFM1被降解88.36%。本研究通过对平菇P1培养产漆酶条件的优化和降解黄曲霉毒素B1实验,确定了平菇P1的培养条件为MSM培养基,pH6.0,培养温度30℃,转速200rpm,在此条件下,790μL平菇P1发酵液可以将1000ngAFB1降解824.32ng,降解率为82.43%。平菇P1发酵液在与AFB1孵育时,振荡混匀后,30℃、静置孵育72h,1000ng AFB1可以被降解76.13%;30℃、200rpm孵育72h,1000ng AFB1可以被降解76.26%,降解能力没有显著差异;研究孵育时间对降解AFB1的能力的影响,最终确定3d是降解AFB1的转折点,降解率由2d时的28.58%增加到75.82%,之后随着孵育时间的延长,降解率可达到91.80%,基本保持稳定;研究孵育温度对降解AFB1的能力的影响,发现孵育温度越低,降解黄曲霉毒素B1的能力越高,但是25℃与30℃时,降解率没有明显的差异。
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