背景目前被大多数人接受的反复种植失败（repeated implantation failure，RIF）的定义为：经过2-6个体外受精（IVF）周期，移植≥10个高质量胚胎仍未妊娠。近年来各辅助生殖中心一次移植的胚胎数目减少（一般控制在1-2个之内），使得RIF的定义有些变化。Margalioth等[1]提出：移植高质量胚胎超过3次未妊娠定义为RIF。RIF是当今生殖领域研究中的难题之一,究其发生原因，可概括为三部分：胚胎质量下降、种植期子宫内膜容受性不足、母体激素与免疫紊乱[1]。随着胚胎冷冻技术、控制性促排卵方案、胚胎移植等技术的日益成熟，胚胎质量方面已有显著的提高，然而子宫内膜容受性方面的研究却进展缓慢。据国内外研究表明，在移植失败的原因当中，内膜因素约占66.7%[2]。子宫内膜容受性是指母体子宫内膜对胚泡的接受能力。在黄体中期，孕酮（progesterone，P）可以使子宫内膜处于一种允许胚泡定位、粘附、侵入的状态并使内膜在胚泡的作用下发生蜕膜性变[3]。在此过程中，新生毛细血管大量形成，各种与子宫内膜容受性、胚胎种植相关的细胞因子相互协调相互作用，为迎接胚胎的到来做好准备。若在子宫内膜向容受状态转变的过程中，血管的生成以及容受性、种植相关因子的表达受阻碍，子宫内膜的容受性将会受到影响。内膜对胚胎的接受能力下降，将会导致种植的失败。前动力蛋白-1(prokineticin-1，PROK1)是近年来发现的一种分泌性蛋白。既往研究发现[4]：PROK1主要表达于卵巢、睾丸、肾上腺等分泌类固醇激素的器官。近年来研究发现[5]：在某些非类固醇激素分泌的器官，如子宫，也有相当数量的表达。PROK1在子宫中的表达主要位于子宫内膜上，并随着月经周期而发生周期性的改变,在黄体中期表达呈一峰值[6]。研究表明，PROK1是一种新型的子宫内膜容受性标志物[7]，能选择性作用于子宫内膜血管内皮细胞，对子宫内膜毛细血管的生成具有调节作用[8]。其与PROK1受体结合，能调控包括白血病抑制因子[9]、IL-8[10]、IL-11[11]等子宫内膜容受性相关因子的表达，参与胚胎种植时的“母-胎对话”。可见，容受性良好的子宫内膜离不开PROK1的正常表达。子宫内膜向分泌期（黄体期）转化是着床的首要条件。孕激素通过与其受体结合，使子宫内膜腺上皮向分泌期转化，在分泌中期，子宫内膜腔上皮肥大出现胞饮突，子宫腺体顶部聚集成束的腺上皮肥大，基质细胞蜕膜化，为胚胎着床提供准备[12]。可见，孕激素在促使内膜向容受状态转变和调节胚胎植入的过程中均发挥着重要的作用。孕激素的生物学作用是通过其与孕激素受体结合后发挥的。因此，孕激素及其受体二者缺一均会影响孕激素作用的发挥。在接受IVF-ET治疗的患者于排卵后常规使用孕酮支持的今天，孕激素受体（progesterone receptor，PR）在黄体中期子宫内膜中的表达就显得尤其重要，低表达的PR将会直接影响子宫内膜容受性的建立以及胚胎在子宫内膜的种植。综上所述，PROK1和PR在子宫内膜容受性的建立以及对胚胎在子宫内膜的种植过程中均发挥着重要的作用。目的通过检测RIF患者（实验组）和曾孕妇女（对照组）黄体中期子宫内膜中PROK1和PR的mRNA和蛋白表达水平，并比较其表达差异，初步探讨子宫内膜黄体中期PROK1、PR的表达水平与RIF的关系，为阐明RIF发病机制提供新的理论依据。方法1、研究对象2013年8月至2014年4月在广州医科大学附属省妇儿医院生殖健康与不孕症科行体外受精-胚胎移植（IVF-ET）或卵泡内单精子注射（ICSI）的21例反复种植失败患者（实验组），年龄30-38岁，平均年龄（34.94±2.75）岁，及同期23例因输卵管间质部阻塞和/或男方因素行IVF-ET/ICSI助孕，且有一次临床妊娠史以上的患者（对照组），年龄29-36岁，平均年龄（32.53±3.68）岁。2、实验方法（1）所有子宫内膜组织均经HE染色，确定为黄体中期后纳入实验。（2）采用实时荧光定量PCR法对两组患者子宫内膜中PROK1和PR的mRNA表达水平进行检测,并比较两组数据之间的差异是否有统计学意义。（3）采用免疫组织化学法对两组子宫内膜中PROK1和PR的蛋白表达水平进行检测，并比较两组数据之间的差异是否有统计学意义。结果1、实验组与对照组子宫内膜组织共44例，均显示黄体中期内膜。2、PROK1和PR的mRNA在44例患者子宫内膜中均有表达。但结果显示实验组中PROK1的mRNA表达水平明显低于对照组（0.21±0.20VS0.36±0.18），异有统计学意义（P＜0.05）；实验组中PR的mRNA表达水平明显低于对照组（0.016±0.006VS0.021±0.004），差异有统计学意义（P＜0.05）。3、PROK1和PR蛋白在44例患者子宫内膜中均有表达。PROK1主要表达于腺上皮细胞、内皮细胞及基质细胞，且腺上皮细胞上的表达稍强于基质细胞及内皮细胞，定位于胞浆，PR亦表达于腺上皮细胞和间质细胞，但定位于细胞核。实验组PROK1的蛋白半定量表达水平明显低于对照组（0.016±0.006VS0.021±0.004），差异有统计学意义（P＜0.05），实验组PR的蛋白半定量表达水平明显低于对照组（2.49±0.87VS4.28±1.22），差异有统计学意义（P＜0.05）。结论1、实验组子宫内膜中PROK1和PR的蛋白的半定量表达水平和mRNA表达水平均明显低于对照组，说明PROK1和PR在RIF患者黄体中期子宫内膜中的相对低表达可能是导致RIF的分子机制之一。