胆囊胆固醇结石病是一种常见病,多发病,其发病机制目前为止尚未完全明确,有待进一步研究探索。随着生活水平的提高,伴随脂质代谢紊乱导致的疾病增多,胆结石发病率也逐年增加。目前,胆固醇逆转运(Reverse cholesterol transport ,RCT)是一个重要的研究课题,本实验旨在通过研究脂质转运的重要调节蛋白三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP binding cassette transport A1, ABCA1)和反映周围组织脂质代谢状况的巨噬细胞在胆囊壁的表达水平,探讨胆囊壁的脂质吸收转运功能和胆石病的发病机制。目的:1、观察ABCA1在不同胆囊病理标本中的表达和分布,探讨其与胆囊壁脂质转运的关系。2、观察在不同胆囊病理标本中CD68阳性的巨噬细胞分布、形态、密度和排列规律,分析其在胆囊壁脂质转运中的作用。3、比较ABCA1在胆囊胆固醇结石病人与对照组胆囊粘膜中的表达水平,分析其与胆固醇结石形成之间的关系。4、比较CD68在胆囊胆固醇结石病人与对照组胆囊壁中的表达水平,分析其与胆固醇结石形成之间的关系。5、比较ABCA1、CD68在胆囊胆固醇结石病人与对照组胆囊壁中的表达水平,分析ABCA1和CD68在胆囊壁脂质转运中的相关性,进一步探讨胆囊胆固醇结石的发病机制。方法:1、标本收集收集胆囊术后的病理标本。1.1实验组:胆囊胆固醇结石病人34例,非结石性慢性胆囊炎合并肝胆管结石11例,胆固醇息肉8例,胆囊结石并急性胆囊炎6例。1.2对照组:选择非胆囊结石病人胆囊标本15例,病理诊断均为正常或接近正常胆囊。1.3所有病例均由HE染色光镜下获得病理诊断,无其他合并症及明显肝功能异常。2、实验方法石蜡切片脱蜡至水,采用PV-9000即用型二步法免疫组织化学染色检测ABCA1、CD68在实验组和对照组胆囊标本中的表达,ABCA1、CD68单克隆抗体的工作浓度均为1:200,以PBS代替一抗作阴性对照。3、统计处理结果采用半定量积分法评判,数据进行统计学分析,行X2检验。结果:1、ABCA1的表达及分布1.1 ABCA1主要在胆囊粘膜上皮细胞顶侧表达,上皮细胞的基底侧、粘膜下层、肌层及浆膜层无明显表达。1.2胆囊胆固醇结石病人的胆囊粘膜ABCA1表达低于对照组胆囊粘膜的表达,两组进行半定量分析,具有统计学意义P <0.005。1.3胆固醇息肉组、胆囊结石并急性胆囊炎组的ABCA1表达降低;与对照组比较有统计学差异。1.4非结石性慢性胆囊炎合并肝胆管结石组的ABCA1表达升高,与对照组比较无统计学差异。2、CD68的表达及分布2.1 CD68主要在胆囊粘膜上皮细胞顶侧表达,胞浆着色,细胞形态为细颗粒状,呈密集分布;粘膜下层细胞大且为圆形或椭圆形,连接成片;肌层及浆膜层有散在分布,量少,细胞中等大小。2.2胆囊胆固醇结石病人的胆囊粘膜CD68表达高于对照组胆囊粘膜的表达,两组进行半定量分析,具有统计学意义P <0.05。2.3非结石性慢性胆囊炎合并肝胆管结石组、胆固醇息肉组CD68表达升高,与对照组比较有统计学差异。3、ABCA1、CD68两因素间比较3.1胆囊胆固醇结石组和胆固醇息肉组病人ABCA1表达降低,CD68表达升高,差异具有统计学意义P <0.05。3.2非结石性慢性胆囊炎合并肝胆管结石组ABCA1、CD68阳性表达均升高,无统计学差异。4、阴性对照无表达。结论:1、ABCA1、CD68主要在胆囊粘膜上皮细胞顶侧表达,说明胆囊粘膜上皮细胞具有吸收和转运脂质的功能。2、ABCA1在胆固醇结石病人胆囊粘膜上皮细胞中表达减弱,可能在胆石病发病机制中起一定作用。3、CD68在胆固醇结石病人胆囊粘膜上皮细胞中表达增强,与胆囊壁的脂质转运和胆结石的形成有关。4、ABCA1与CD68在胆囊壁中的表达呈副相关性,脂质调节蛋白ABCA1功能的下降,导致胆囊壁脂质吸收和转运功能障碍,脂质沉积,诱导巨噬细胞的增加,加剧了胆汁中胆固醇的过饱和状态,促进胆固醇结石的形成。