文昌鱼尾部再生过程的形态组织细胞学及BMP2/4基因的表达模式研究

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动物再生(Regeneration)是生物体可以重新生长出或构建恢复失去或损伤的组织或器官过程。相关研究主要集中于几种模式生物,但是在头索动物文昌鱼中的相关研究却比较匮乏。本文首次对青岛文昌鱼尾部再生的过程进行形态学观察和细胞组织学分析;同时在克隆了BMP基因cDNA的基础上,研究了其在文昌鱼尾部再生过程中的时空表达模式和相对表达量的变化规律。首先,形态学观察记录了文昌鱼在切除尾部(肛门后切除)之后的再生过程。发现文昌鱼的尾部再生过程大约需要4个月的时间;在此基础上,利用组织学切片技术和HE染色的方法对不同再生时期文昌鱼尾部进行了细胞组织学分析,发现文昌鱼再生展现了类似于脊椎动物新建再生的特点。文昌鱼尾部再生大体经历三个阶段:第一个阶段伤口愈合期,在手术切除尾部后,伤口附近的表皮细胞通过增值和细胞迁移逐渐在损伤处形成受伤表皮层(wound epidermis),进而覆盖整个伤口,这个过程大约持续2周左右;第二个阶段再生胚基期,大约在三周后,在不断增厚的表皮层下方,出现了类似于间质细胞的细胞集体,而且随着细胞数量的增加,细胞集体体积增大,向外突起,称之为再生胚基;第三个阶段细胞分化和形态发生期,各种细胞和组织结构开始分化和形成,例如在七周之后再生肌肉组织和脊索可见。此外,本文还运用TUNEL技术对文昌鱼再生时期的细胞的凋亡进行了研究,发现细胞凋亡主要发生在再生早期阶段,在尾部切除伤口附近检测到了明显的细胞凋亡阳性信号。在上述形态组织细胞学分析的基础上,我们还研究了文昌鱼BMP2/4基因在再生过程中的表达规律。首先利用原位杂交技术对BMP2/4基因的时空表达模式进行了研究,发现BMP2/4基因主要在再生早期(1-14天),切口附近表达,在再生过程中随着时间的推移,BMP2/4基因在组织上的表达信号逐渐减弱,直至伤口愈合后,14天之后没有检测到明显的阳性信号。其次,利用Real-Time PCR技术,研究了文昌鱼尾部再生组织过程中BMP2/4基因表达强度的变化,结果表明,以正常尾部为对照,再生的第一天其相对表达量上调到对照的4倍,在随后几天其相对表达量发生显著下降。这一结果与原位杂交的结果相互印证。表明BMP2/4基因在文昌鱼尾部再生过程中发挥重要的作用,特别是在再生的早期阶段。综上所述,本文从形态学、组织细胞学和BMP2/4在再生时期的表达变化规律对文昌鱼尾部再生的不同层面进行系统的研究。为研究生物再生的进化提供了重要数据。
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