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背景和目的:脓毒症是感染引起的全身炎症反应综合症。是创伤、烧伤、休克、感染等临床急危重患者严重的并发症之一,也是诱发多器官功能障碍综合症的重要原因。在重症病例中脓毒症的死亡率可高达30%-50%。而Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)信号转导系统在脓毒症的炎症反应过程中起着重要的作用。TLRs可感知不同的病原体相关分子模式(pathogen associated molecular patterns ,PAMPs),继而通过髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88,MyD88 )、β干扰素TIR结构域衔接蛋白( TIR-domain-containing adapter-inducing interferon-β,TRIF)等连接蛋白引起下游的一系列炎症反应。多项研究表明,当机体曾经接触过某些PAMPs后,再次接触大剂量相同成分或细菌,会出现暂时地敏感性下降,即免疫耐受的现象,表现为炎症因子产生减少,动物的存活率提高。但在临床实践中我们很难预先给予小剂量病原体诱导耐受。有研究发现细菌脂蛋白(bacterial lipoprotein,BLP)诱导的炎症反应是通过TLR2受体相关信号转导产生的,本实验主要探讨抗TLR2抗体是否影响BLP攻击时,人单核细胞株THP-1细胞TLR2受体相关信号转导通路及炎症因子的产生。方法:1.将THP-1细胞分5组,空白对照组:既不予封闭性抗TLR2抗体封闭,也不予BLP攻击;同型对照组:加入与封闭性抗TLR2抗体同源的免疫球蛋白(10μg/ml)室温孵育0.5h,再加入BLP(1000ng/ml)CO2孵箱中孵育14 h;直接攻击组:不予封闭性抗TLR2抗体封闭,直接加入BLP(1000ng/ml)CO2孵箱中孵育14 h;A+B组:加入封闭性抗TLR2抗体(10μg/ml)室温孵育0.5h,再加入BLP(1000ng/ml)CO2孵箱中孵育14 h;B+A组:加入BLP(1000ng/ml)室温孵育0.5h,再加入封闭性抗TLR2抗体(10μg/ml) CO2孵箱中孵育14 h。2.酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组THP-1细胞上清TNF-α、IL-6的变化。3.应用免疫印迹法(Western Blot)检测各实验组THP-1细胞胞膜TLR2、胞浆MyD88及胞核NF-κB表达情况。4.免疫荧光法直观观察各组THP-1细胞NF-κB移位情况。结果:1.空白对照组、同型对照组、直接攻击组、A+B组及B+A组细胞上清TNF-α的水平分别为:98.14±22.14 pg/ml、1423.18±363.14 pg/ml、1408.05±420.00 pg/ml、1026.59±286.76 pg/ml和878.80±349.02 pg/ml ;空白对照组、同型对照组、直接攻击组、A+B组及B+A组细胞上清IL-6的水平分别为:0 pg/ml、140.69±59.79 pg/ml、155.44±73.64 pg/ml、70.60±16.19 pg/ml和66.49±6.69 pg/ml ;A+B组、B+A组、同型对照组及直接攻击组TNF-α、IL-6的表达均明显高于空白对照组,有统计学差异(P﹤0.05)。A+B组、B+A组TNF-α、IL-6的表达均低于同型对照组及直接攻击组,具有统计学差异,(P﹤0.05)。2.同型对照组、直接攻击组、A+B组及B+A组的NF-κB表达均高于空白对照组(P﹤0.05),A+B组及B+A组的NF-κB表达均低于同型对照组及直接攻击组,具有统计学差异(P﹤0.05)。3.免疫荧光法显示A+B组、B+A组NF-κB的核内移位较同型对照组及直接攻击组减少。4.各组间TLR2和MyD88的表达无统计学差异(P>0.05)。结论:封闭性抗TLR2抗体可以明显减少BLP攻击THP-1细胞所致的NF-κB的表达及TNF-α、IL-6的释放,可能对机体产生保护作用。